《常用层析技术原理、分类及其应用》讲义（PPT课件）

常用层析技术原理 分类及其应用

常用层析技术原理、 分类及其应用

层析( cfirofarogralpry) 厅:俘分珂缉引质洿淑(沅动)经过一固物 质(固,)时,据溶淑行力离的蛋质澌拉 小.出衫少消力学,行力蛋到质纠力正 组中分,并以不同羽度流经河远到 离缦质的引的

层析（chromatography） 原理：待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物 质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大 小、电核多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在 两相中反复分配，并以不同的速度流经固定相而达到 分离蛋白质的目的

分类 1流动相和固定相 主要来用液相层析法x 2固定相的形状 纸层析,薄层层析,柱层析 3压力 快速、低、中、高 2.02×105Pa5.05×105Pa,20.2×1 05Pa

分类 1 流动相和固定相 主要采用液相层析法 2 固定相的形状 纸层析，薄层层析，柱层析 3 压力 快速、低、中、高 (2.02×105Pa,5.05×105Pa,20.2×1 05Pa )

分类 层析方向子 轴向流层析径相流层析 5分离操作方式 洗脱展开、迎头分析、顶替展开 6分配机理 离子交换、凝胶过滤、亲和层桥

分类 4 层析方向 轴向流层析、径相流层析 5 分离操作方式 洗脱展开、迎头分析、顶替展开 6 分配机理 离子交换、凝胶过滤、亲和层析等

令 色谱图 洗脱法顶替法迎头法

洗脱法 顶替法 迎头法 色谱带 与 色谱图

凝胶过滤层析( gelfiltration chromatography 原理: 利用凝胶 的经胺过滤介质)为固定相,根据料液中 通常 溶质相对 高的液相层 排阻极限:不能扩散到凝胶网络内部的最小分孑的相对分子质量 分级范围 分类: 葡聚糖凝胶层析 Sephadex 琼脂糖凝胶层析 Sepharose 聚丙烯酰胺凝胶层析 Polyacrylamide Gel 琼脂糖及葡聚糖组成的复合凝胶 Superdex 应用: 脱盐 测定分子量(球蛋白) 分离纯化

原理： 利用凝胶粒子（通常称为凝胶过滤介质）为固定相，根据料液中 溶质相对分子质量的差别进行分离的液相层析法 排阻极限：不能扩散到凝胶网络内部的最小分子的相对分子质量 分级范围 分类： 葡聚糖凝胶层析Sephadex 琼脂糖凝胶层析Sepharose 聚丙烯酰胺凝胶层析Polyacrylamide Gel 琼脂糖及葡聚糖组成的复合凝胶Superdex 应用： 脱盐 测定分子量（球蛋白） 分离纯化 凝胶过滤层析（gel filtration chromatography）

凝胶过滤层析( gelfiltration chromatography) (a)gel filtration chromatography Large protein Small protein Layer Add buffer sample to wash Collect on proteins °。 fractions column through column 一般 由葡 聚糖 制成 Polymer gel bead

凝胶过滤层析（gel filtration chromatography） 一般 由葡 聚糖 制成

离子交换层析( ion-exchange chromatography) 原理 周之裔褶甭甥的薹虐蘆雰柔裔 分类: 离子交换纤维素 阴离子:强酸型,中强酸型,弱酸型 阳离子:强碱型,中强碱型,弱碱型 离子交换交联葡聚糖 离子交换琼脂糖 应用实例: DEAE纤维素柱色谱分离人血清蛋白 羧甲基纤维素柱色谱分离卵清蛋白

原理： 利用离子交换剂为固定相，是根据荷电溶质与离子交 换剂之间静电相互作用力的差别进行溶质分离的洗脱 层析法 分类： 离子交换纤维素 阴离子：强酸型，中强酸型，弱酸型 阳离子：强碱型，中强碱型，弱碱型 离子交换交联葡聚糖 离子交换琼脂糖 应用实例: DEAE-纤维素柱色谱分离人血清蛋白 羧甲基纤维素柱色谱分离卵清蛋白 离子交换层析（ion-exchange chromatography）

离子交换层析( ion-exchange chromatography) (b) lon-exchange chromatography Negatively charged protein yh Positively charged Elute negatively . o protein charged protein Collect with salt solution no sample positively (NaCl)00 Q on charged column proteins Nat C/ 阴离 父 换树 脂颗 粒(+) Positively charged gel bead 4321

离子交换层析（ion-exchange chromatography） 阴离 子交 换树 脂颗 粒(＋)

抗体亲和层析( antibody- affinity chromatography) 原 蛋白质与结合在介质上的配基间的特异亲和力为工作 应用 抗体 核酸 凝集素 染料配基 固相化金属亲和层析 疏水作用层析

原理： 蛋白质与结合在介质上的配基间的特异亲和力为工作 基础 应用: 抗体 核酸 凝集素 染料配基 固相化金属亲和层析 疏水作用层析 抗体亲和层析（antibody－affinity chromatography）