甘肃农业大学：《基因工程》课程教学资源（课件讲稿）第七章 转基因植物的检测与鉴定

第七章转基因植物的检测与鉴定

第七章 转基因植物的检测与鉴定

主要内容 一、PCR检测 二、报告基因的表达检测 三、Southern杂交鉴定 四、Northern杂交鉴定 五、外源基因表达蛋白的检测 六、其它方法

主要内容 一、PCR检测 二、报告基因的表达检测 三、Southern杂交鉴定 四、Northern杂交鉴定 五、外源基因表达蛋白的检测 六、其它方法

根据国内外几十年的研究，目前认为转基因植物 的证据应有以下几点： 要有严格的对照（包括阳性及阴性对照）； 转化当代要提供外源基因整合和表达的分子生 物学证据(PCR检测、Southern杂交，Northern 杂交，Western杂交)与表型数据（酶活性分析 或其它)； 3 提供外源基因控制的表型性状证据（如抗虫、 抗病等)；

根据国内外几十年的研究， 目前认为转基因植物 的证据应有以下几点： ① 要有严格的对照（包括阳性及阴性对照）； ② 转化当代要提供外源基因整合和表达的分子生 物学证据（PCR检测、Southern杂交，Northern 杂交，Western杂交）与表型数据（酶活性分析 或其它）； ③ 提供外源基因控制的表型性状证据（如抗虫、 抗病等）；

根据该植物的繁殖方式（有性繁殖还是无性繁 殖)提供遗传证据。有性繁殖作物需有目的基 因控制的表型性状传递给后代的证据，无性繁 殖作物有繁殖一代稳定遗传的证据

④ 根据该植物的繁殖方式（有性繁殖还是无性繁 殖）提供遗传证据。有性繁殖作物需有目的基 因控制的表型性状传递给后代的证据，无性繁 殖作物有繁殖一代稳定遗传的证据

一、PCR检测 1.概述 2.基本原理 3.特点 4.步骤

一、PCR检测 1. 概述 2. 基本原理 3. 特点 4. 步骤

一、PCR检测 1.概述 PCR是聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)的简称。它模拟DNA聚合酶在生物体 内的催化作用，根据检测的目的片段及一定的原 则设计引物，与模板DNA经过变性、退火、延伸 三步骤的数个循环，对特异DNA序列进行扩增， 可以在一只小小的离心管中几小时内使目的DNA 片段扩增数百万倍

一、PCR检测 1. 概述 PCR是聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）的简称。它模拟DNA聚合酶在生物体 内的催化作用，根据检测的目的片段及一定的原 则设计引物，与模板DNA经过变性、退火、延伸 三步骤的数个循环，对特异DNA序列进行扩增， 可以在一只小小的离心管中几小时内使目的DNA 片段扩增数百万倍

一、PCR检测 1.概述 PcR检测所需的模板量仅为10ng以内，而且粗 提的DNA就可以得到良好的扩增效果，因而这一 技术的出现为外源基因整合的检测提供了便利条 件，尤其是在转化材料少又需及早检测的时候。 但由于PCR扩增十分灵敏，有时会出现假阳性护 增，因此检测的只是初步结果

一、PCR检测 1. 概述 PCR检测所需的模板量仅为10ng以内，而且粗 提的DNA就可以得到良好的扩增效果，因而这一 技术的出现为外源基因整合的检测提供了便利条 件，尤其是在转化材料少又需及早检测的时候。 但由于PCR扩增十分灵敏，有时会出现假阳性扩 增，因此检测的只是初步结果

Nobel prizewinners in chemistry 1994 穆利斯(Kary Mullis1944~) 美国化学家

穆利斯(Kary Mullis 1944～) 美国化学家 Nobel prizewinners in chemistry 1994

一、PCR检测 2.基本原理 ·DNA模板变性 双链DNA是通过94℃左右的高温使其发生变性， 形成单链DNA。 。 模板与引物退火 将合成的两个寡核苷酸引物分别与待扩增DNA 两端的序列互补。通过控制退火条件，引物就能准 确地与扩增区域的两端配对

一、PCR检测 2. 基本原理 • DNA模板变性 双链DNA是通过94℃左右的高温使其发生变性， 形成单链DNA。 • 模板与引物退火 将合成的两个寡核苷酸引物分别与待扩增DNA 两端的序列互补。通过控制退火条件，引物就能准 确地与扩增区域的两端配对

一、PCR检测 2.基本原理 ·引物延伸 在4种dNTP底物及Mg2+存在条件下，DNA聚合酶 在最适作用温度可将单核苷酸从引物3′端掺入， 沿模板延伸合成新股DNA,每一循环的产物可作为 下一循环的模板

一、PCR检测 2. 基本原理 • 引物延伸 在4种dNTP底物及Mg2+存在条件下，DNA聚合酶 在最适作用温度可将单核苷酸从引物3′端掺入， 沿模板延伸合成新股DNA，每一循环的产物可作为 下一循环的模板