安徽科技学院:《现代生物工程学》课程教学资源(PPT课件)基因工程——第四章 基因在大肠杆菌、酵母中的高效的表达

第四章 基因在大肠杆菌、酵 母中的高效的表达 第一节基因的表达系统与表达策略 第二节基因在大肠杆菌中的高效表达 第三节基因在酵母中的表达
第四章 基因在大肠杆菌、酵 母中的高效的表达 第一节 基因的表达系统与表达策略 第二节 基因在大肠杆菌中的高效表达 第三节 基因在酵母中的表达

前言 ●基因表达是指结构基因在生物体中的转录、 翻译以 及所有加工过程。 ●基因工程主要目标之一是生产常规方法难以生产的 大量蛋白质产物一即实现基因的高效表达。 ●基因高效表达研究是指外源基因在某种细胞中的表 达活动,即剪切下外源基因片段,拼接到另一个基因 表达体系中,使其能获得原生物活性又可高产的表达 产物
前言 ⚫基因表达是指结构基因在生物体中的转录、翻译以 及所有加工过程。 ⚫基因工程主要目标之一是生产常规方法难以生产的 大量蛋白质产物—即实现基因的高效表达。 ⚫基因高效表达研究是指外源基因在某种细胞中的表 达活动,即剪切下外源基因片段,拼接到另一个基因 表达体系中,使其能获得原生物活性又可高产的表达 产物

第一节基因的表达系统与表达策略 ●最佳的基因表达体系: ()目的基因的表达产量高; (2)表达产物稳定; (3)生物活性高; (4)表达产物容易分离纯化
⚫最佳的基因表达体系: ⑴目的基因的表达产量高; ⑵表达产物稳定; ⑶生物活性高; ⑷表达产物容易分离纯化。 第一节基因的表达系统与表达策略

宿主细胞的选择 一、适合目的基因表达的宿主细胞的要求: 1、容易获得较高浓度的细胞; 2、能利用易得廉价原料: 3、不致病、不产生内毒素: 4、发热量低、需氧低、适当的发酵温度和细胞形态: 5、容易进行代谢调控: 6、容易进行DNA重组技术操作; 7、产物的产量、产率高, 8、产物容易提取纯化
宿主细胞的选择 一、适合目的基因表达的宿主细胞的要求: 1、容易获得较高浓度的细胞; 2、能利用易得廉价原料; 3、不致病、不产生内毒素; 4、发热量低、需氧低、适当的发酵温度和细胞形态; 5、容易进行代谢调控; 6、容易进行DNA重组技术操作; 7、产物的产量、产率高, 8、产物容易提取纯化

二、宿主细胞分为两大类 1、原核细胞:常用有大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、 链霉菌等; 2、真核细胞:常用有酵母、丝状真菌、哺乳动物 细胞等
二、宿主细胞分为两大类: 1、原核细胞:常用有大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、 链霉菌等; 2、真核细胞:常用有酵母、丝状真菌、哺乳动物 细胞等

大肠杆菌目前仍是基因工程研究中采用最多的原 核表达体系。 优越性: ①对大肠杆菌的基础生物学、分子遗传学等背景 知识和基因表达的调控机理已有了深刻了解。 ②有各类菌株和载体系列。 ③目前已实现多种基因的高效表达。表达基因产 物形式多样细胞内不溶性表达(包含体)、细胞内 可溶性表达、细胞周质表达等。 ④易培养,成本低
大肠杆菌目前仍是基因工程研究中采用最多的原 核表达体系。 优越性: ①对大肠杆菌的基础生物学、分子遗传学等背景 知识和基因表达的调控机理已有了深刻了解。 ②有各类菌株和载体系列。 ③目前已实现多种基因的高效表达。表达基因产 物形式多样:细胞内不溶性表达(包含体)、细胞内 可溶性表达、细胞周质表达等。 ④易培养,成本低

缺点: ①大肠杆菌中的表达不存在信号肽,产品 多为胞内产物,提取困难。 ②因分泌能力不足,真核蛋白质常形成不 溶性的包含体,表达产物需经变性复性 才恢复活性。 ③蛋白质不能糖基化。产物蛋白质N端多 余一个蛋氨酸残基。 ④其内毒素很难除去
缺点: ①大肠杆菌中的表达不存在信号肽,产品 多为胞内产物,提取困难。 ②因分泌能力不足,真核蛋白质常形成不 溶性的包含体,表达产物需经变性复性 才恢复活性。 ③蛋白质不能糖基化。产物蛋白质N端多 余一个蛋氨酸残基。 ④其内毒素很难除去

酵母 酵母菌是研究基因表达最有效 的单细胞真核微生物。其基因组小 世代时间短,有单倍体双倍体两种 形式,繁殖迅速,无毒性。能外分 泌,产物可糖基化。已有不少真核 基因成功表达
酵母 酵母菌是研究基因表达最有效 的单细胞真核微生物。其基因组小, 世代时间短,有单倍体双倍体两种 形式,繁殖迅速,无毒性。能外分 泌,产物可糖基化。已有不少真核 基因成功表达

基因表达的基本过程 Replication mRNA Translation DNA (protein synthesis) Transcription (RNA synthesis) Protein RNA
基因表达的基本过程

基因表达的基本过程 基因的表达主要涉及到两个过程:转录和翻译。 首先,目的基因通过转录(transcription)形成mRNA(信使 RNA,messenger RNA ) DNA 然后,tRNA(转运 RNA,transfer RNA)将 各种氨基酸运送到核糖 体并按照mRNA的密码 RNA 子顺序将各种氨基酸连 接成特定的氨基酸序列 (translation)最终得到基 因的表达产物(蛋白 质)。 Protein
基因表达的基本过程 基因的表达主要涉及到两个过程:转录和翻译。 首先,目的基因通过转录(transcription)形成mRNA(信使 RNA, messenger RNA ); 然后, tRNA (转运 RNA, transfer RNA)将 各种氨基酸运送到核糖 体并按照mRNA的密码 子顺序将各种氨基酸连 接成特定的氨基酸序列 (translation) 最终得到基 因的表达产物 ( 蛋 白 质)
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