《发酵制药》课程教学资源（PPT课件讲稿）细菌发酵制药（天冬酰胺酶发酵）

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子学习情境11 天冬酰胺酶发酵 LOGO Edit your company slogan

LOGO Edit your company slogan 子学习情境1.1 天冬酰胺酶发酵

天冬酰胺酶生产的工艺流程 菌种培养) (种子培养) (发酵) 大肠杆菌肉汤培养基 →肉汤蘑种,玉米浆 玉米浆 种子液 发酵液 37℃,24h 37℃,4~8h 37℃,6~8h (压滤,风干)4 (提取) 丙酮 醋酸 甘氨酸 干菌体 刪酸緩冲液 提取液 ◆粗酶 37℃,pB83 pH42~4.4 60℃,30nin (精制) 聚乙二醇 酶溶液 无菌分装 无热原酶液 天冬酰胺茁冻干制剂 不同四值处理 LOGO

LOGO 天冬酰胺酶生产的工艺流程

子学习情境1天冬酰胺酶发酵 任务1菌种保藏 任务2菌种复壮 任务3种子扩大培养 任务4发酵罐的使用和维护 任务5发酵控制、分离纯化及活性测定 LOGO

LOGO 任务1 菌种保藏 任务2 菌种复壮 任务3 种子扩大培养 任务4 发酵罐的使用和维护 任务5 发酵控制、分离纯化及活性测定 子学习情境1 天冬酰胺酶发酵

任务1菌种保藏 LOGO

LOGO 任务1 菌种保藏

菌种保藏的目的 保持菌种的存活率与优良遗传性状 防止菌种退化与污染 使已经退化的菌种恢复原有的性状 总之,就是防止优良遗传性状的 丧失和菌种死亡 LOGO

LOGO 一、菌种保藏的目的 ▪ 保持菌种的存活率与优良遗传性状 ； ▪ 防止菌种退化与污染 ▪ 使已经退化的菌种恢复原有的性状 总之，就是防止优良遗传性状的 丧失和菌种死亡

二、菌种保藏的原理 ■挑选典型培养物( typical culture)的优良纯种 并创造最有利于休眠的环境条件,使微生物处于 代谢不活泼、生长受抑制的休眠状态。 人工创造条件使微生物代谢活动处于不活泼状态 利用微生物的孢子、芽孢及营养体,给以不适合 其萌发、生长、繁殖的条件,即低温、干燥、缺 氧、缺营养等手段来达到菌种保藏的目的。 LOGO

LOGO 二、菌种保藏的原理 ▪ 挑选典型培养物（typical culture）的优良纯种， 并创造最有利于休眠的环境条件，使微生物处于 代谢不活泼、生长受抑制的休眠状态。 ▪ 菌种的保藏主要是依据微生物的生理、生化特性， 人工创造条件使微生物代谢活动处于不活泼状态。 利用微生物的孢子、芽孢及营养体，给以不适合 其萌发、生长、繁殖的条件，即低温、干燥、缺 氧、缺营养等手段来达到菌种保藏的目的

菌种的保藏方法 斜面保藏法 沙土保藏法 冷冻真空干燥保藏法 ■试管熔封保藏法 矿油保存法 LOGO

LOGO 三、菌种的保藏方法 ▪ 斜面保藏法 ▪ 沙土保藏法 ▪ 冷冻真空干燥保藏法 ▪ 试管熔封保藏法 ▪ 矿油保存法

(一)斜面保藏法 1、贴标签:将注有菌株名称和接种日期 的标签贴在试管斜面正上方 2、接种:将待藏菌种用些面接种法移种 至标明菌名的相应试管斜面上。 3、培养:细菌置37°℃恒温培养15~24h, 酵母菌置28~30℃恒温培养36~60h,放 线菌和丝状真菌置28℃培养4~7d 4、收藏:为防止棉塞受潮长杂菌,管口 棉花应用牛皮纸包扎或用熔化的固体石蜡 熔封棉塞后置4℃C冰箱保存。保存温度不 宜太低,否则会因结冰脱水而加速菌种的 死亡 斜面菌种 LOGO

LOGO （一）斜面保藏法 ▪ 1、贴标签：将注有菌株名称和接种日期 的标签贴在试管斜面正上方。 ▪ 2、接种：将待藏菌种用些面接种法移种 至标明菌名的相应试管斜面上。 ▪ 3、培养：细菌置37℃恒温培养15～24h， 酵母菌置28～30℃恒温培养36～60h，放 线菌和丝状真菌置28℃培养4～7d。 ▪ 4、收藏：为防止棉塞受潮长杂菌，管口 棉花应用牛皮纸包扎或用熔化的固体石蜡 熔封棉塞后置4℃冰箱保存。保存温度不 宜太低，否则会因结冰脱水而加速菌种的 死亡。 斜面菌种

(二)沙土管或硅胶管保藏法 处理沙土:取河沙经60目筛子过筛以除去大的颗粒,用10%HCL浸泡(用 量以浸没沙面为度)2~4h(或 30min 质,然后倒去盐酸, 用流水冲洗至中性,烘干或晒 取非耕作层瘦黄土(不含有机质)风 粉碎,用100~120目的筛子过筛备用。 ■2、装沙土管:将沙与土按2:1或4:1(W)比例混合均匀,装入试管 10mm×100mm 装置约1cm高,加棉塞后用高压蒸汽灭菌(121℃C灭 菌30min)。灭菌后取 肉膏蛋白胨或麦芽汁培养液中,在合适的温 度下培养一段时间确证无菌生长才能使用 3、制备菌液:吸3m无菌水至斜面菌种管内,用接种环轻轻搅动,洗一下孢 子制成孢子悬液 加孢子液:吸取上述孢子液0.1~0.5m于每一沙土管中,加入量以湿润沙 土达23高度为宜 ■5、干燥:将含菌的沙土管放入干燥器中,干燥器内用培养皿盛P2O5(或变 色硅胶)做干燥剂,再用真空泵抽气2~4h以加速干燥。 沙土管可选择下列 (1)保藏于王燥器中。(2)将沙士管取出 火焰熔封后保藏。(3)将沙土管装入含CaC2等干燥剂的大试管内,塞上 橡皮塞并用蜡封管口,置于4℃C冰箱中保藏 7、恢复培养:使用时挑少量混有孢子的沙士接种于斜面培养基上即可。沙土 管仍可原法继续保藏。 LOGO

LOGO （二）沙土管或硅胶管保藏法 ▪ 1、处理沙土：取河沙经60目筛子过筛以除去大的颗粒，用10%HCL浸泡（用 量以浸没沙面为度）2～4h（或煮沸30min）以除去有机质，然后倒去盐酸， 用流水冲洗至中性，烘干或晒干备用。另取非耕作层瘦黄土（不含有机质）风 干、粉碎，用100～120目的筛子过筛备用。 ▪ 2、装沙土管：将沙与土按2：1或4：1（W/W）比例混合均匀，装入试管 （10mm×100 mm）中，装置约1cm高，加棉塞后用高压蒸汽灭菌（121℃灭 菌30min）。灭菌后取少许置于牛肉膏蛋白胨或麦芽汁培养液中，在合适的温 度下培养一段时间确证无菌生长才能使用。 ▪ 3、制备菌液：吸3ml无菌水至斜面菌种管内，用接种环轻轻搅动，洗一下孢 子制成孢子悬液。 ▪ 4、加孢子液：吸取上述孢子液0.1～0.5ml于每一沙土管中，加入量以湿润沙 土达2/3高度为宜。 ▪ 5、干燥：将含菌的沙土管放入干燥器中，干燥器内用培养皿盛P2O5（或变 色硅胶）做干燥剂，再用真空泵抽气2～4h以加速干燥。 ▪ 6、收藏：沙土管可选择下列方法之一。⑴保藏于干燥器中。⑵将沙土管取出， 管口用火焰熔封后保藏。⑶将沙土管装入含CaCl2等干燥剂的大试管内，塞上 橡皮塞并用蜡封管口，置于4℃冰箱中保藏。 ▪ 7、恢复培养：使用时挑少量混有孢子的沙土接种于斜面培养基上即可。沙土 管仍可原法继续保藏