上海交通大学：《生物技术与人类》通识课程教学资源（课堂讨论PPT）单克隆抗体

单克隆抗体 胡毓杰 516021910641 生物医学工程学院

单克隆抗体 胡毓杰 516021910641 生物医学工程学院

抗体 。抗体，是一种由浆细胞 (效应B细胞)分泌， 被免疫系统用来鉴别与 中和外来物质如细菌、 Ba公百 病毒等的大型Y形蛋白 质，仅被发现存在于脊 忽基端 越变区、 轻链 椎动物的血液等体液中， 及其B细胞的细胞膜表 面[1]。抗体能识别特 灯变区 定外来物的一个独特特 征，该外来目标被称为 牧链区 外体指合区 抗原。 0晴基 磷内二陈经 破基蜘

 抗体，是一种由浆细胞 （效应B细胞）分泌， 被免疫系统用来鉴别与 中和外来物质如细菌、 病毒等的大型Y形蛋白 质，仅被发现存在于脊 椎动物的血液等体液中， 及其B细胞的细胞膜表 面 [1] 。抗体能识别特 定外来物的一个独特特 征，该外来目标被称为 抗原

单克隆抗体简介 单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一 特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术 来制备，杂交瘤(hybridoma)抗体技术是在细胞融合技术的 基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限 繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。 0 1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦在自然杂交技术 的基础上，创建立杂交瘤技术 。获得1984年诺贝尔医学奖

 单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一 特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术 来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的 基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限 繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。  1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦在自然杂交技术 的基础上，创建立杂交瘤技术  获得1984年诺贝尔医学奖

制备过程 。1.免疫动物：免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠 产生致敏B淋巴细胞的过程。一般选用6-8周龄雌性 BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激 相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏 B淋巴细胞。 。2.细胞融合：采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取 出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。将准备 好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并 加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴 细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞

 1. 免疫动物：免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠 产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性 BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激 相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏 B淋巴细胞。  2.细胞融合：采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取 出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备 好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并 加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴 细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞

制备过程 。3选择性培养选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细 胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未 融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转 移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。未融合的淋 巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其 本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。只有融合的杂交 瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌昤磷酸核糖 转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能 在HAT培养基中存活和增殖

 3.选择性培养选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细 胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未 融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转 移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。 未融合的淋 巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其 本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。 只有融合的杂交 瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖 转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能 在HAT培养基中存活和增殖

制备过程 4.杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化：在HAT培养基中生 长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗 体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有 限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快 速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体 的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其 所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、 亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。 0 5.单克隆抗体的大量制备：单克隆抗体的大量制备主要 采用动物体内诱生法和体外培养法

 4.杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化：在HAT培养基中生 长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗 体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有 限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快 速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体 的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其 所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、 亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。  5.单克隆抗体的大量制备：单克隆抗体的大量制备主要 采用动物体内诱生法和体外培养法

应用 。1.检验医学诊断试剂：①病原微生物抗原、 抗体的检测；②肿瘤抗原的检测；③免疫细胞 及其亚群的的检测；④激素测定；⑤细胞因子 的测定。 。2.蛋白质的提纯 。3.肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术

 1．检验医学诊断试剂：①病原微生物抗原、 抗体的检测；②肿瘤抗原的检测；③免疫细胞 及其亚群的的检测；④激素测定；⑤细胞因子 的测定。  2．蛋白质的提纯  3． 肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术

优势 杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不 发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异 性、高均一性的抗体。 可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均 一的抗体。 由于可能得到“无限量”的均一性抗体， 所以适用 于以标记抗体为特点的免疫学分析方法， 如IRMA 和ELISA等。 由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可 用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗

 杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不 发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异 性、高均一性的抗体。  可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均 一的抗体。  由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用 于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如IRMA 和ELISA等。  由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可 用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗

局限性 单克隆抗体固有的亲和性和同限的生物活性限 制了它的应用范围。由于单克隆抗体不能进行 沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单 克隆抗体完成。 。单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。 。制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗 体的价格也较高

 单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限 制了它的应用范围。由于单克隆抗体不能进行 沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单 克隆抗体完成。  单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。  制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗 体的价格也较高