河南农业大学：《动物微生物学》课程教学资源（实验指导）实验十八 霉菌的形态观察

实验十八霉菌的形态观察 目的要求 学习霉菌的标本制备方法，观察根霉、毛霉、青霉、曲霉、白地霉的形态构造。 材料 .菌种：白地莓(Ceotrichum candidum)摇瓶培养液：根霉(Rhizopus sp.、毛霉 2.染料：乳酸石炭酸棉蓝液。 3.其他：显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、解剖针、培养皿、玻璃棒、滤纸、20% 甘油。 原理 霉菌菌丝较大，细胞容易收缩变形，孢子容易飞散，在制各霉菌标木时，常用乳酸石炭 酸溶液作为介质，具有不使细胞变形，可杀菌防腐，不易干燥，能保持较长时间等优点，若 加入棉蓝，又具有一定染色效果。 霉菌的有些结构在制片过程中易被破坏，影响观察，可采用载玻片培养法。此法便于直 接显微镜下观察，尤其适用于根霉的假根，曲霉的足细胞及分生孢子链等结构的生长情况的 观察，并且还可在同一标本上观察到微生物发有的不同阶段的形态。 方法 1,白地悬的观察 取一块干净的载玻片，加一滴白地霉培养液，加盖玻片制成水浸标本片，在显微镜下观 察白地霉菌丝及节孢子的形态。 2.其他幕菌观察 1) 般观察 加一滴乳酸石炭酸棉益液于洁净的载玻片中央，用解剖针从菌落的 边缘处挑取少量带有孢子的菌丝，放入乳酸石炭酸棉蓝液中，再细心地把菌丝挑散开，加出 玻片，注意不要有气泡产生。置于显微镜下观察，菌丝呈蓝色，颜色的深度随菌龄的增加而 减弱。 观察根霉时，注意观察其菌丝（无横隔）、假根、孢子囊柄（与假根相对着生）、孢子囊、 囊轴、囊托、孢子囊孢子及厚垣孢子 观察毛霉时，注意观察其菌丝（无横隔）、孢子囊柄、囊轴、孢子囊孢子及厚坦孢子 观察曲霉时，注意观察其菌丝（有横隔）、足细胞，分生孢子梗、顶囊、小梗（形状、 层数及在顶囊上的者生情况)，分生孢子的者生情况。 观察青霉时，注意观察其菌丝（有横隔），分生孢子梗，带状枝（小梗的轮数及对称性） 分生孢子的者生情况。 (2)载玻片培养法 ①湿室准备：在培养皿底部先放一张圆形滤纸，在滤纸上依次放上“Z”型玻璃棒、载 玻片和盖玻片（两片），盖上培养皿盖，用纸包扎好，高压(9.8×10Pa)灭菌20分钟。 ②用接种环挑取少量霉菌孢子，置于湿室的戟玻片的中央，用无菌滴管滴加少量冷却至 45℃左右的察氏培养基。 ③将镊子在火焰上灼烧灭菌后，取无菌盖玻片盖在培养基上，然后轻轻压一下。用滴管 取融化的石蜡将盖玻片的三边密封，如图19-1.(1)所示。 ④将3~5ml20%甘油倒于湿室内，以保持混度，如图191.(2)，将培养皿置于28℃ 恒温箱中培养2天。 ⑤将培养好的载玻片取出，置于显微镜下观察

实验十八 霉菌的形态观察 目的要求 学习霉菌的标本制备方法，观察根霉、毛霉、青霉、曲霉、白地霉的形态构造。 材料 1. 菌种：白地霉（Ceotrichum candidum）摇瓶培养液；根霉（Rhizopus sp．）、毛霉 （Mucorsp．）、曲霉（Aspergillus sp．）、青霉（Penicilli—um sp.）平板。 2. 染料：乳酸石炭酸棉蓝液。 3. 其他：显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、解剖针、培养皿、玻璃棒、滤纸、20％ 甘油。 原理 霉菌菌丝较大，细胞容易收缩变形，孢子容易飞散，在制备霉菌标本时，常用乳酸石炭 酸溶液作为介质，具有不使细胞变形，可杀菌防腐，不易干燥，能保持较长时间等优点，若 加入棉蓝，又具有一定染色效果。 霉菌的有些结构在制片过程中易被破坏，影响观察，可采用载玻片培养法。此法便于直 接显微镜下观察，尤其适用于根霉的假根，曲霉的足细胞及分生孢子链等结构的生长情况的 观察，并且还可在同一标本上观察到微生物发育的不同阶段的形态。 方法 1．白地霉的观察 取一块干净的载玻片，加一滴白地霉培养液，加盖玻片制成水浸标本片，在显微镜下观 察白地霉菌丝及节孢子的形态。 2．其他霉菌观察 （1）一般观察法：加一滴乳酸石炭酸棉蓝液于洁净的载玻片中央，用解剖针从菌落的 边缘处挑取少量带有孢子的菌丝，放入乳酸石炭酸棉蓝液中，再细心地把菌丝挑散开，加盖 玻片，注意不要有气泡产生。置于显微镜下观察，菌丝呈蓝色，颜色的深度随菌龄的增加而 减弱。 观察根霉时，注意观察其菌丝（无横隔）、假根、孢子囊柄（与假根相对着生）、孢子囊、 囊轴、囊托、孢子囊孢子及厚垣孢子。 观察毛霉时，注意观察其菌丝（无横隔）、孢子囊柄、囊轴、孢子囊孢子及厚垣孢子。 观察曲霉时，注意观察其菌丝（有横隔）、足细胞，分生孢子梗、顶囊、小梗（形状、 层数及在顶囊上的着生情况），分生孢子的着生情况。 观察青霉时，注意观察其菌丝（有横隔），分生孢子梗，带状枝（小梗的轮数及对称性）， 分生孢子的着生情况。 （2）载玻片培养法： ①湿室准备：在培养皿底部先放一张圆形滤纸，在滤纸上依次放上“Z”型玻璃棒、载 玻片和盖玻片（两片），盖上培养皿盖，用纸包扎好，高压（9.8×104Pa）灭菌 20 分钟。 ②用接种环挑取少量霉菌孢子，置于湿室的载玻片的中央，用无菌滴管滴加少量冷却至 45℃左右的察氏培养基。 ③将镊子在火焰上灼烧灭菌后，取无菌盖玻片盖在培养基上，然后轻轻压一下。用滴管 取融化的石蜡将盖玻片的三边密封，如图 19-1-（1）所示。 ④将 3～5m1 20％甘油倒于湿室内，以保持湿度，如图 19-1-（2），将培养皿置于 28℃ 恒温箱中培养 2 天。 ⑤将培养好的载玻片取出，置于显微镜下观察

(2) 纸 丝 者片 我威片 (1) 图19-1霉菌的载片培养 内容 1.制片观察白地霉菌丝及节孢子形态。 2.制片观察根霉、毛霉、青霉及曲霉的形态构造。 3.对根霉、曲霉、青霉作载片培养，观察其形态构造 作业 1.绘出所观察到的各种霉的形态图，注明各种结构的名称。 2.列表比较根霉、毛霉、曲霉、青霉形态结构及繁殖方式的异同。 3.为什么在实验中的一般培养条件下难观察到霉菌的有性孢子？

图 19-1 霉菌的载片培养 内容 1. 制片观察白地霉菌丝及节孢子形态。 2. 制片观察根霉、毛霉、青霉及曲霉的形态构造。 3. 对根霉、曲霉、青霉作载片培养，观察其形态构造。 作业 1. 绘出所观察到的各种霉的形态图，注明各种结构的名称。 2. 列表比较根霉、毛霉、曲霉、青霉形态结构及繁殖方式的异同。 3. 为什么在实验中的一般培养条件下难观察到霉菌的有性孢子?