海南大学：《基因工程》课程教学资源（PPT课件）第2章 分子克隆工具酶 第一节 限制性核酸内切酶 Restriction endonuclease

思考题 1.上世纪40-70年代初分子生物学领域理论上和技术上的哪 些重大突破对于基因工程的诞生起到了决定性的作用？☑ 2.在你的脑海中，基因工程的基本流程是怎样的？ 3.基因工程的概念？

思 考 题 1. 上世纪40-70年代初分子生物学领域理论上和技术上的哪 些重大突破对于基因工程的诞生起到了决定性的作用？ 2. 在你的脑海中，基因工程的基本流程是怎样的？ 3. 基因工程的概念?

基因工程gene engineering ◆基因工程：在分子水平上， 采取工程建设方式→按照 预先设计的蓝图→借助于实验室技术将某种生物的基 因或基因组转移到另一种生物中去→使后者定向获得 新遗传性状的一门技术。 口通过对基因的操作来定向改变或修饰生物体，具有明确 的应用目的的活动

基因工程 gene engineering ⧫ 基因工程：在分子水平上，采取工程建设方式 → 按照 预先设计的蓝图 → 借助于实验室技术将某种生物的基 因或基因组转移到另一种生物中去 → 使后者定向获得 新遗传性状的一门技术。 通过对基因的操作来定向改变或修饰生物体，具有明确 的应用目的的活动

Foreign DNA to be inserted 分离目的基因（分） Joining Plasmid vector Antibiotic-resistance gene 体外重组（切、连、转） Recombinant DNA molecule Introduction into host cell 扩增繁殖（选、鉴） Selection for cells containing recombinant DNA molecules by growth in the presence of antibiotic t O FIGURE 5-11 The cloning of DNA in a plasmid

分离目的基因（分） 体外重组（切、连、转） 扩增繁殖（选、鉴）

第二章分子克隆工具酶 工具酶的出现为DNA修饰和DNA重组创造了条件 切割位点可为获得DNA的物理图的特殊标记 利用限制性内切酶切割产生特殊DNA片段的能力使得 纯化那些DNA片段成为可能 获得的限制性DNA片段可作为DNA操作中的基本介质

第二章 分子克隆工具酶 工具酶的出现为DNA修饰和DNA重组创造了条件 ▪ 切割位点可为获得DNA的物理图的特殊标记 ▪ 利用限制性内切酶切割产生特殊DNA片段的能力使得 纯化那些DNA片段成为可能 ▪ 获得的限制性DNA片段可作为DNA操作中的基本介质

第一节 限制性核酸内切酶 第二节DNA聚合酶 第三节 DNA连接酶 第四节 甲基化酶 第五节其他酶

第一节 限制性核酸内切酶 第二节 DNA聚合酶 第三节 DNA连接酶 第四节 甲基化酶 第五节 其他酶

第一节限制性核酸内切酶大 Restriction endonuclease 一、 限制修饰 识别的序列 产生的床端 四、 末端长度的影响 位点偏好 六 反应条件 星星活性 八、 单链的切割 九、 酶切位点引入 十、影响酶活性的因素

第一节 限制性核酸内切酶 Restriction endonuclease 一、限制修饰 二、识别的序列 三、产生的末端 四、末端长度的影响 五、位点偏好 六、反应条件 七、星星活性 八、单链的切割 九、酶切位点引入 十、影响酶活性的因素

一、限制与修饰 Restriction and modification 20世纪50年代初，发现细菌具有nost controlled specificity ,噬菌体具有代表性和普遍性，其在不同宿主中的转染频率 不同，当)在感染某一宿主后，再去感染其它宿主时受到限 制，其感染频率大减低，这种现象称为限制与修饰现象

一、限制与修饰 Restriction and modification 20世纪50年代初，发现细菌具有host controlled specificity 噬菌体具有代表性和普遍性，其在不同宿主中的转染频率 不同，当在感染某一宿主后，再去感染其它宿主时受到限 制，其感染频率大大减低，这种现象称为限制与修饰现象

Pfu(plaque forming unit)噬菌斑形成单位：每毫升试 样中所含有的具侵染性的噬菌体粒子数。， PHA GE DILUTION SERIES BACTERIAL 当一个噬菌体浸染一个敏感 LAWN 细胞后，释放一群子代；通 过琼脂层的扩散又浸染周围 PLAQUE FHAGE 1/10 1/1001/1000 的细胞，反复几次，在菌苔 PHAGE PHAGE PHAGE 0.1 ML OF 上形成一个透明不长菌的白 DILUTION SPREAD 斑。 ON PLATE

Pfu (plaque forming unit) 噬菌斑形成单位：每毫升试 样中所含有的具侵染性的噬菌体粒子数。 当一个噬菌体浸染一个敏感 细胞后，释放一群子代；通 过琼脂层的扩散又浸染周围 的细胞，反复几次，在菌苔 上形成一个透明不长菌的白 斑

1.现象 大肠杆菌B 大肠杆菌K A(K) 50年代初发现了由寄主控制的限制和修饰现象

 50年代初发现了由寄主控制的限制和修饰现象 大肠杆菌B 大肠杆菌K 1 1 10 — 4 10 — 4 1. 现 象 