海南大学：《基因工程》课程教学资源（PPT课件）第3章 分子克隆载体 第一节 质粒载体（plasimid vectors）

第三章分子克隆载体 引l言（introduction）, 第一节质粒载体 （plasimid vectors） 第二节1噬菌体载体（phage vectors). 第三节单链丝状噬菌体载体

第三章 分子克隆载体 引 言（introduction） 第一节 质粒载体（plasimid vectors） 第二节 λ噬菌体载体（phage vectors） 第三节 单链丝状噬菌体载体

引言 基因克隆的本质是使目的基因在特定的条件下得 到扩增和表达，而目的基因本身无法进行复制， 所以就必须借助于“载体”及其“寄主细胞”来 实现。 这种能与目的基因结合，能将外源DNA携 主细胞，且有完整的复制和转录功能 DNA大分子称之为载体(vector)

引 言 基因克隆的本质是使目的基因在特定的条件下得 到扩增和表达，而目的基因本身无法进行复制， 所以就必须借助于“载体”及其“寄主细胞”来 实现。 这种能与目的基因结合，能将外源DNA携带入宿 主细胞，且有完整的复制和转录功能 DNA大分子称之为载体（vector）

克隆载体必须具备的特性： 能在寄主细胞中进行独立的复制和表达； 2.具有1-2个选择标记基因，如对抗生素的抗性基因等； 3.具备多克隆位点(MCS),而且可携带外源DNA片段的 长度范围较宽。 4. 自身分子量较小，在寄主细胞中的拷贝数高，易于操作 和DNA的制备

1. 能在寄主细胞中进行独立的复制和表达； 2. 具有1-2个选择标记基因，如对抗生素的抗性基因等； 3. 具备多克隆位点（MCS），而且可携带外源DNA片段的 长度范围较宽。 4. 自身分子量较小，在寄主细胞中的拷贝数高，易于操作 和DNA的制备。 克隆载体必须具备的特性：

Characteristics of vectors for gene cloning Foreign gene MCS Marker

Characteristics of vectors for gene cloning MCS Marker Foreign gene

分类 根据功能分类： 克隆载体(cloning vector)：主要是对目的基因克隆，建 立DNA文库和CDNA文库，其上有复制子即可； 表达载体(expression vector)?：能使目的基因在宿主细胞 中表达的一类载体。这类载体既有复制子，更要有强启 动子； 穿梭载体(shuttle vector):这类载体可以在原核细胞中复 制，也可在真核细胞中扩增和表达

分 类 根据功能分类： 克隆载体（cloning vector）：主要是对目的基因克隆，建 立DNA文库和cDNA文库，其上有复制子即可； 表达载体（expression vector）：能使目的基因在宿主细胞 中表达的一类载体。这类载体既有复制子，更要有强启 动子； 穿梭载体（shuttle vector）：这类载体可以在原核细胞中复 制，也可在真核细胞中扩增和表达

根据工作方式分类： 质粒载体（plasmid vector） 噬菌体载体（phage vector） 黏粒载体（cosmid vector） 噬菌粒载体( （phagemid vector）

质粒载体（plasmid vector） 噬菌体载体（phage vector） 黏粒载体（cosmid vector） 噬菌粒载体（phagemid vector） 根据工作方式分类：

第一节质粒载体Plasmid vector3 是独立于染色体以外的能自主复制的双链闭合 环状DNA分子。 狼0 存在于细菌、霉菌、蓝藻、酵母等细胞中

第一节 质粒载体 Plasmid vectors 是独立于染色体以外的能自主复制的双链闭合 环状DNA分子。 存在于细菌、霉菌、蓝藻、酵母等细胞中

大肠杆菌的质粒显微示意

大肠杆菌的质粒显微示意

质粒的基本特性 1.一般生物学特点 >染色体外的遗传因子，能进行自我复制，但依赖于宿 主编码的酶和蛋白质。 >大多数为双链，闭环DNA分子，少数为线性。 >大小1kb≈200kb,也有更大。 >质粒的表型：抗生素的抗性、产生抗生素、降解复杂 有机化合物产生毒素（如大肠杆菌素，肠毒素)，限 制酶与修饰酶、固氨、杀虫等

一 、质粒的基本特性 1．一般生物学特点 Ø染色体外的遗传因子，能进行自我复制，但依赖于宿 主编码的酶和蛋白质。 Ø大多数为双链，闭环DNA分子，少数为线性。 Ø大小1kb～200kb,也有更大。 Ø质粒的表型: 抗生素的抗性、产生抗生素、降解复杂 有机化合物产生毒素（如大肠杆菌素，肠毒素），限 制酶与修饰酶、固氮、杀虫等

质粒DNA的构型 共价闭合环状DWA（CCODNA):当其两条核苷酸链均保 持着完整的环形结构时，呈超螺旋(SC （super coil0 0 Right-handed spiral Left-handed superhelix

质粒DNA的构型 共价闭合环状DNA（cccDNA)： 呈超螺旋（SC）（super coil）