南方医科大学：《分子生物学》课程教学资源（课件讲稿）基因克隆与基因体外表达

基因工程与基因体外表达培训课 件

重组DNA技术的发展史 1865年G.J.Mendel的豌豆杂交试验。 1944年OT.Avery的肺炎球菌转化实验。 1973年美国斯坦福大学的科学家构建第一个重组DNA分子。 1977年美国南旧金山由博耶和斯旺森建立世界上第一家遗传 工程公司，专门应用重组DNA技术制造医学上重要的 药物。 1980年开始建造第一家应用重组DNA技术生产胰岛素的工厂。 1997年英国罗林研究所成功的克隆了多莉

1972年，P.Berg:构建第一个DNA重组分子 1973年，S.S.Cohen:第一个基因克隆实验 1977年，基因工程产品的出现 H.W.Boyer,第一个基因工程产品(SS) 1997年，动物克隆：克隆羊多莉 2001年，人类基因组计划

一、重组DNA技术相关概念 (一)DNA克隆 >克隆(clone):来自同一始祖的相同副本或拷 贝的集合。 >获取同一拷贝的过程称为克隆化(cloning), 即无性繁殖

> 技术水平：分子克隆molecular clone) (即DNA克隆) 细胞克隆 个体克隆（动物或植物）

>DNA克隆 应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质 (同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的 DNA)与载体DNA接合成一具有自我复制能力的DNA 分子一复制子(replicon),继而通过转化或转染宿主细 胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增提 取获得大量同一DNA分子，也称基因克隆或重组DNA recombinant DNA)

> 生物技术工程：基因工程、蛋白质工程、酶 工程、细胞工程等。 > 基因工程(genetic engineering) 实现基因 克隆所用的方法及相关的工作称基因工程， 又称重组DNA工艺学。 >目的： ①分离获得某一感兴趣的基因或DNA ②获得感兴趣基因的表达产物（蛋白质）

重组DNA技术基本原理 >基本原理 目的基因的获取→克隆载体的选择和构建 →外源基因与载体的连接→DNA导入受体细胞 一重组体的筛选一→克隆基因的表达

第一节 基因克隆是利用工具酶 进行操作

关健步骤一的工其：基因的剪刀 限制酶 关键步骤二的工具：基因的针线 DNA连接酶 关键步骤三的工具：基因的运载工具一运载体