陕西师范大学：光电功能材料《有机化学实验》课程教学课件（PPT讲稿）实验十四 薄层色谱

基础有机化学实验（十四）薄层色谱实验目的>了解色谱法分离分析有机物的原理和特点。>掌握薄层色谱分离分析有机物的机理>掌握薄层色谱的操作技能

1 基础有机化学实验（十四） 实验目的 ➢ 了解色谱法分离分析有机物的原理和特点。 ➢ 掌握薄层色谱分离分析有机物的机理。 ➢ 掌握薄层色谱的操作技能。 薄层色谱

色谱法及原理色谱法（Chromatography）亦称“色谱分析”“色谱分析法”和“层析法”等，是让混合物随着某些气相或液相（流动相）通过某些液相或固相（固定相）进行分离提纯的方法，色谱法是分离、纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。色谱法的基本原理：是利用混合物中各组分在流动相和固定相中的吸附或溶解性能（分配）的不同，或其亲和性的差异，使混合物的溶液流经该种固定相时，进行反复的吸附或分配的作用，从而使各组分分离。色谱法的特点：效率高、应用范围广、样品用量少、分离分析速度快、灵敏度高、易实现自动化

2 色谱法及原理 色谱法（Chromatography）亦称“色谱分析”“色谱分析法” 和“层析法”等，是让混合物随着某些气相或液相（流动相） 通过某些液相或固相（固定相）进行分离提纯的方法，色谱 法是分离、纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。 色谱法的基本原理：是利用混合物中各组分在流动相和固定 相中的吸附或溶解性能（分配）的不同，或其亲和性的差异， 使混合物的溶液流经该种固定相时，进行反复的吸附或分配 的作用，从而使各组分分离。 色谱法的特点：效率高、应用范围广、样品用量少、分离分 析速度快、灵敏度高、易实现自动化

色谱法分类按两相状态：气相色谱（气-液、气-固）、液相色谱（液液、液-固）、电泳法、超临界流体流动相。按分离机理：吸附色谱、分配色谱、离子色谱、凝胶色谱。按操作方式：柱色谱、纸色谱、薄层色谱。按用途：分析型色谱、制备型色谱。常用的色谱法：柱色谱、纸色谱、薄层色谱、气相色谱、高效液相色谱

3 色谱法分类 按两相状态：气相色谱（气-液、气-固）、液相色谱（液- 液、液-固）、电泳法、超临界流体流动相。 按分离机理：吸附色谱、分配色谱、离子色谱、凝胶色谱。 按操作方式：柱色谱、纸色谱、薄层色谱。 按用途：分析型色谱、制备型色谱。 常用的色谱法：柱色谱、纸色谱、薄层色谱、气相色谱、 高效液相色谱

薄层色谱薄层色谱：又叫薄板层析，是色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，属固-液吸附色谱。特点：快速、灵敏、高选择性、简便、应用广泛。应用：化合物鉴别和少量化合物的分离、检测药品含量、鉴别反应程度、摸索高效液相色谱的条件。原理：利用吸附剂对不同成分吸附力的大小及展开剂解吸附作用的差异进行分离。吸附牢固的组分随展开剂移动慢，吸附弱的组分随展开剂移动快，一段时间后，组分被分离

4 薄层色谱 薄层色谱：又叫薄板层析，是色谱法中的一种，是快速分离和定性分 析少量物质的一种很重要的实验技术，属固-液吸附色谱。 特点：快速、灵敏、高选择性、简便、应用广泛。 应用：化合物鉴别和少量化合物的分离、检测药品含量、鉴别反应程 度、摸索高效液相色谱的条件。 原理：利用吸附剂对不同成分吸附力的大小及展开剂解吸附作用的差 异进行分离。吸附牢固的组分随展开剂移动慢，吸附弱的组分 随展开剂移动快，一段时间后，组分被分离

薄层色谱吸附剂（固定相）的选择硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭和大孔吸附树脂等。（1）硅胶：极性吸附剂，应用范围广（2）氧化铝：8极性吸附剂，较硅胶强物理吸附为主，氢键吸附为辅b.物理吸附为主，氢键吸附为辅C.微碱性，不直接用于酸类成分的分离微酸性，不直接用于碱性成分的分离机械强度好，适用于薄层色谱碱性氧化铝：适用于碳氢化合物、生物吸附容量大，与羟基数目有关碱以及其它碱性化合物的分离，中性氧化铝：应用最广，适用于醛、酮、常用硅胶的规格：硅胶H，硅胶G，硅胶GF254等醒以及酯类化合物的分离、酸性氧化铝：适用于有机酸类的分离。硅胶和氧化铝含水量越高，吸附活性越弱只要在110℃左右加热，这些“自由水”就能被可逆性地除去。利用这一原理可以对吸附剂进行活化（去水）和脱活化（加水）处理，以控制吸附剂的活性

5 薄层色谱 吸附剂（固定相）的选择 硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭和大孔吸附树脂等

薄层色谱被分离物质的极性与吸附能力的关系硅胶、氧化铝薄层：被分离物质极性越大，越易被吸附一般规律：（1）官能团极性越大，整个分子极性越大，越易被吸附；（2）形成分子内H键时，被吸附力减弱：（3）同系物中，分子量越大，极性越小，被吸附力越弱常见官能团极性顺序烷烃<烯烃<醚类<硝基化合物<酯类<酮类<醛类<硫醇<胺类醇类<酚类羧酸类

6 薄层色谱 被分离物质的极性与吸附能力的关系

薄层色谱展开剂（流动相）的选择选择原则：被分离组分极性大展开剂极性大；被分离组分极性小展开剂极性小。常用溶剂极性大小石油醚<环已烷<四氯化碳<苯<甲苯<乙醚<三氯甲烷（氯仿）<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<水极性较大的溶剂可以使化合物在薄层上移动。极性较小的溶剂降低极性大的溶剂的洗脱能力，使R值降低。中等极性的溶剂往往起着使极性相差较大溶剂混合均匀的作用

7 薄层色谱 展开剂（流动相）的选择 选择原则：被分离组分极性大展开剂极性大； 被分离组分极性小展开剂极性小

薄层色谱薄层板的制备（1）软板的制备软板：直接将吸附剂铺在玻璃板上制成，不加粘合剂要求：厚度→随分离要求而定，一般0.25~0.5mm玻璃棒推动速度不宜过快、也不应停顿→影响厚度均一性优点：方法简便、随用随铺、展开速度快缺点：吸附剂易脱落、只能用近水平展开，效果差移动方向

8 薄层色谱 薄层板的制备

薄层色谱薄层板的制备硬板：吸附剂加粘合剂制成的板（2）硬板的制备常用的粘合剂：缎石膏（G）美羧甲基纤维素钠（CMC-Na）硅胶G或氧化铝G，直接加水调成糊状倒在玻璃板上硅胶或氧化铝，加羧甲基纤维素钠水溶液调成糊状a、倾注法：均匀铺开、振荡、晾干、活化、置干燥器中备用C、机械涂布法：平铺法：b、全自动涂布器

9 薄层色谱 薄层板的制备

薄层色谱点样样品溶液：一般用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等挥发性有机溶剂，最好用与展开剂极性相似的溶剂溶解试样。点样方法：划线、样品记号点、点样注：动作要轻，毛细管或点样器不能混用，斑点大小适当，可多次点样拖尾长班点样基线：距底边1cm平头50ul微量点样器样点直径：<2mm全自动点样仪点间距离：1-1.5cm10

10 薄层色谱 点样 样品溶液：一般用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等挥发性有机溶剂，最 好用与展开剂极性相似的溶剂溶解试样。 点样基线：距底边1cm 样点直径：<2mm 点间距离：1-1.5cm