厦门大学：《生物化学实验》课程教学资源（讲义）离子交换柱层析纯化碱性磷酸酶

学科命生SSCIENCES实验十三离子交换柱层析纯化碱性磷酸酶石艳度门大笔止干至美格工电

自强不息 止于至善 1 实验十三 离子交换柱层析 纯化碱性磷酸酶 石艳

科命生?一、目的要求SCIENCES1.学习和掌握离子交换柱层析分离蛋白质的原理与方法。2.通过离子交换柱层析对碱性磷酸酶进行纯化门大王强不鸟止干至美

自强不息 止于至善 一、目的要求 1. 学习和掌握离子交换柱层析分离蛋白质的原理与方法。 2. 通过离子交换柱层析对碱性磷酸酶进行纯化

科命生学本次实验安排1.部分操作步骤及仪器的使用介绍IENCES2.分组，各组装柱、平衡3.继续介绍原理、步骤4．各组上样、淋洗蛋白质（仪器调节好后，可以离开吃饭各组留一个同学观察）5．吃完饭加盐洗脱，收集样品，测定酶活力6.整理玻璃仪器，洗柱子，回收DEAE，结束实验门大王强不息止于至姜

自强不息 止于至善 本次实验安排 1. 部分操作步骤及仪器的使用介绍 2. 分组，各组装柱、平衡 3. 继续介绍原理、步骤 4. 各组上样、淋洗蛋白质（仪器调节好后，可以离开吃饭， 各组留一个同学观察） 5. 吃完饭加盐洗脱，收集样品，测定酶活力。 6. 整理玻璃仪器，洗柱子，回收DEAE，结束实验

二、 原理chromatographytechniquesGel filtrationHydrophobicinteractionAffinityReversedphaselonexchangeFig.1.Separationprinciples inchromatographicpurification.唐门大王止干至姜工电

自强不息 止于至善 二、原理 chromatography techniques

命生离子交换柱层析lonexchangechromatography（IEX）SCIENCES不同蛋白质由于等电点不同，在同一pH介质中所带的电荷种类数量不同，因而与离子交换剂的结合能力不同。可以通过改变洗脱液的酸碱度或盐浓度梯度，削弱其结合能力，把结合的蛋白质分别洗脱下来，达到纯化的目的。门大王强不鸟止干至美

自强不息 止于至善 离子交换柱层析Ion exchange chromatography (IEX) ： 不同蛋白质由于等电点不同，在同一pH介质中所带的电荷种类数量不 同，因而与离子交换剂的结合能力不同。可以通过改变洗脱液的酸碱 度或盐浓度梯度，削弱其结合能力，把结合的蛋白质分别洗脱下来， 达到纯化的目的

命生CEffectofpHonchargeCOOHNHRhydrogengainedhigh pHlowpHcOOnegativechargepositive chargeNHeRhydrogen lostCOORNH2度门大王上于至善强工电

自强不息 止于至善

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sample application and wash equilibration elution regeneration - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + - + - - - - - - - - - - anion exchanger bead

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