清华大学：《微生物学实验》第三讲 实验三细菌革兰氏染色

[实验三]细菌普通染色 和革兰氏染色 清华大学微生物实验室,100084

[实验三] 细菌普通染色 和革兰氏染色 清华大学微生物实验室,100084

目的要求 a.掌握细菌涂片标本的制备方法和普 通染色的步驟和关键点 b.掌握革兰氏染色法的步骤和关键点 C.识别细菌的革兰氏染色结果并画图 d.学习无菌操作技术

•目的要求 •a. 掌握细菌涂片标本的制备方法和普 通染色的步骤和关键点 •b. 掌握革兰氏染色法的步骤和关键点 •c. 识别细菌的革兰氏染色结果并画图 •d. 学习无菌操作技术

材料用具 显徼镜,擦镜纸,纱布 革兰氏染液 香柏油,自来水,95%酒精: 载玻片,插镜纸,接种环镊子,酒精灯 金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,未知 菌12小时的液体培养液 大肠杆菌和酵母菌平板

• 材料用具 • 显微镜，擦镜纸，纱布 • 革兰氏染液 • 香柏油,自来水,95%酒精; • 载玻片,插镜纸,接种环,镊子,酒精灯; • 金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,未知 菌12小时的液体培养液 • 大肠杆菌和酵母菌平板

实验步骤 1.涂片 左手持菌液试管,右手 持接种环在火焰中灼烧, 冷却后从试管中去菌液 滴,在洁净载玻片上 做一涂膜 从固体斜面或平板上取 菌时,用无菌接种环取 少量菌体,涂抹均匀于 玻片上预先滴有的一滴 自来水中

实验步骤 ◼ 1.涂片 ◼ 左手持菌液试管,右手 持接种环在火焰中灼烧, 冷却后从试管中去菌液 一滴,在洁净载玻片上 做一涂膜; ◼ 从固体斜面或平板上取 菌时,用无菌接种环取 少量菌体,涂抹均匀于 玻片上预先滴有的一滴 自来水中;

实验步骤 2.干燥 在空气中自然干燥或在 火焰快速通过干燥( 热固定同步进行) 3.热固定 用镊子夹住涂片一端, 在火焰上连续通过几次 以载玻片在手背上试感 觉不烫为宜

实验步骤 ◼ 2.干燥 ◼ 在空气中自然干燥或在 火焰快速通过干燥(与 热固定同步进行). ◼ 3.热固定 ◼ 用镊子夹住涂片一端, 在火焰上连续通过几次; 以载玻片在手背上试感 觉不烫为宜

实验步骤 ■4染色 在固定的标本上加结晶 紫染液1-2滴,染色lmin, 轻轻滴加水洗;吸干,加 半滴水,盖上盖玻片,滴 上半滴镜油油镜检 到此实际上即为细菌 普通染色) 揭去盖玻片,吸干水,滴 加1-2滴革氏碘液媒染 lmin,轻轻水洗,吸干

实验步骤 ◼ 4.染色 ◼ 在固定的标本上加结晶 紫染液1-2滴,染色1min, 轻轻滴加水洗; 吸干, 加 半滴水, 盖上盖玻片, 滴 上半滴镜油油镜检。 (到此实际上即为细菌 普通染色) ◼ 揭去盖玻片,吸干水, 滴 加1-2滴革氏碘液媒染 1min, 轻轻水洗,吸干

实验步骤 滴加95%乙醇溶液(或 30%丙酮乙醇脱色,轻 轻摇动玻片至液滴无色 不要过分脱色(约30秒 立即轻轻滴加水洗;吸 滴加蕃红染液复染3 轻轻滴加水洗; 吸干载玻片背面及标本 周围水渍滴上半滴水, 盖上盖玻片,油镜镜检;

实验步骤 ◼ 滴加95%乙醇溶液(或 30%丙酮乙醇脱色),轻 轻摇动玻片至液滴无色, 不要过分脱色(约30秒), 立即轻轻滴加水洗;吸 干。 ◼ 滴加蕃红染液复染3min, 轻轻滴加水洗; ◼ 吸干载玻片背面及标本 周围水渍,滴上半滴水， 盖上盖玻片,油镜镜检;

实验步骤 ■5镜检 注意标本中细菌的 形态, 大小排列和颜色 革兰氏阳性菌为紫 色 革兰氏阴性菌为红

实验步骤 ◼ 5.镜检 ◼ 注意标本中细菌的 形态, 大小,排列,和颜色. ◼ 革兰氏阳性菌为紫 色; ◼ 革兰氏阴性菌为红 色;

金黄色葡萄球菌(24hrs)染色结果 擦 FIGURE 3. 7 A Gram stain of a 24-hour culture of Staphylococcus aureus, yielding uniform results. All cells are

金黄色葡萄球菌(24hrs)染色结果

金黄色葡萄球菌(48hrs)染色结果 FIGURE 3. 8 A Gram stain of a 48-hour culture of Staphylococcus aureus. A 48-hour culture does not yield uniform results. Even though most cells are purple, a Gram-positive reaction, some cells are red, a Gram

金黄色葡萄球菌(48hrs)染色结果