厦门大学：《现代生物实验学》课程教学课件（PPT讲稿）实验八 透射电子显微镜及扫描电子显微镜的使用

实验 八-1 细胞超微结构观察与透射电子 显微镜的使用

实验 八-1 细胞超微结构观察与透射电子 显微镜的使用

掌握透射电子显微镜的成像基本原理及其 应用 实验目的与要求

掌握透射电子显微镜的成像基本原理及其 应用 实验目的与要求

一、透射电子显微镜的成像基本原理 在真空条件下，电子束经高压加速后，穿 透样品时形成散射电子和透射电子，它们 在电磁透镜的作用下在荧光屏上成像

一、透射电子显微镜的成像基本原理 在真空条件下，电子束经高压加速后，穿 透样品时形成散射电子和透射电子，它们 在电磁透镜的作用下在荧光屏上成像

Cathode (tungsten C Anode cylindet. not shown) First Specimon Specimen slage Obiective lens intermediate lens Projector lens Viawing screen FigureA-21 ATramission Electron Microscope (a)A photograph and (b)a schematic diagram of a TEM 6

显微镜 分辨本领 光源 透镜 真空 成像原理 LM TEM 200nm 100nm 0.1nm 可见光 （400-700） 紫外光 （约 200nm) 电子束 （0.01-0.9） 玻璃透镜 玻璃透镜 电磁透镜 不要求真空 不要求真空 要求真空 1.33x10-5～ 1.33x10-3Pa 利用样品对光的吸收形 成明暗反差和颜色变化 利用样品对电子的散射 和透射形成明暗反差 电镜与光镜的比较

显微镜 分辨本领 光源 透镜 真空 成像原理 LM TEM 200nm 100nm 0.1nm 可见光 （400-700） 紫外光 （约 200nm) 电子束 （0.01-0.9） 玻璃透镜 玻璃透镜 电磁透镜 不要求真空 不要求真空 要求真空 1.33x10-5～ 1.33x10-3Pa 利用样品对光的吸收形 成明暗反差和颜色变化 利用样品对电子的散射 和透射形成明暗反差 电镜与光镜的比较

 超薄切片技术 用于电镜观察的样本制备 负染色技术（Negative staining） 染色背景，衬托出样品的精细结构 冰冻蚀刻技术（Freeze etching） 冰冻断裂与蚀刻复型：主要用来观察膜断裂面的蛋白质颗粒 和膜表面结构。 电镜三维重构技术 电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合而形成的 具有重要应用前景的一门新技术。 电镜三维重构技术与X-射线晶体衍射技术及核磁共振 分析技术相结合，是当前结构生物学（Structural Biology） （主要研究生物大分子空间结构及其相互关系）的主要实验手段。 主要电镜制样技术

 超薄切片技术 用于电镜观察的样本制备 负染色技术（Negative staining） 染色背景，衬托出样品的精细结构 冰冻蚀刻技术（Freeze etching） 冰冻断裂与蚀刻复型：主要用来观察膜断裂面的蛋白质颗粒 和膜表面结构。 电镜三维重构技术 电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合而形成的 具有重要应用前景的一门新技术。 电镜三维重构技术与X-射线晶体衍射技术及核磁共振 分析技术相结合，是当前结构生物学（Structural Biology） （主要研究生物大分子空间结构及其相互关系）的主要实验手段。 主要电镜制样技术

超薄切片技术主要包括取材、固定、 包埋、切片、染色等步骤

超薄切片技术主要包括取材、固定、 包埋、切片、染色等步骤

(a) ) Figure 18.20 Examples of a light microscopic and electron microscopic autoradiograph. (a)Light microscopic autoradiograph of a polytene chromosome from the insect Chironomts,showing extensive incorporation of PHJuridine into RNA in the puffed regions of the chromosome.Autoradi- ographs of this type confirmed that the chromosome puffs are sites of transcription.This micrograph can be compared with that of Figure 10.8b,which shows the same chromosome as seen in the scan ning electron microscope.(b)Electron microscopic autoradiograph of a bone marrow cell incubated in [SS]O,for 5 minutes and immediately fixed.Sulfate incorporation-as revealed by the black silver grains-is localized in the Golgi complex (arrow).(a:From C.Pelling,Chromosoma 15:98,1964;b: from R.W.Young,J.Cell Biol.57:177,1973:by copyright permission of the Rockefeller University Press.)

二、作业: 试比较电子显微镜与普通光学显 微镜的异同

二、作业: 试比较电子显微镜与普通光学显 微镜的异同

实验八 -2 细胞超微结构观察与扫描电子显微镜的使用

实验八 -2 细胞超微结构观察与扫描电子显微镜的使用