华东理工大学：《基因工程》课程教学资源（课件讲稿）第四章 基因工程的操作过程（PPT）

生物工程专业核心课程 基因工程 华东理工大学张惠展

生物工程专业核心课程 基 因 工 程 华东理工大学 张惠展

基因工程 1基因工程的基本概念 2基因工程的基本原理 3基因工程所需的基本条件 4基因工程的操作过程 5目的基因的克隆与基因文库的构建 6大肠杆菌基因工程 7酵母基因工程 8哺乳动物基因工程 9高等植物基因工程

基因工程 5 2 3 4 1 6 7 8 9 基因工程的基本概念 基因工程的基本原理 基因工程所需的基本条件 基因工程的操作过程 目的基因的克隆与基因文库的构建 大肠杆菌基因工程 酵母基因工程 哺乳动物基因工程 高等植物基因工程

4基因工程的操作过程 ADNA的体外重组(切、接) B重组DNA分子的转化和扩增(转、增) C转化子的筛选和鉴定(检)

4 基因工程的操作过程 C 转化子的筛选和鉴定（检） B 重组DNA分子的转化和扩增（转、增） A DNA的体外重组（切、接）

4基因工程的操作过程 切 接 转 增 检 3三)((

4 基因工程的操作过程 切 接 转 增 检

4基因工程的操作过程 ADNA的体外重组(切与接) 同种内切酶生产的粘性末端的连接 同尾酶生产的粘性末端的连接 不同粘性末端的连接 人工粘性末端的连接 ●.性末端的更换 ●重组率

A DNA的体外重组（切与接） 4 基因工程的操作过程 同种内切酶生产的粘性末端的连接 同尾酶生产的粘性末端的连接 不同粘性末端的连接 粘性末端的更换 人工粘性末端的连接 重组率

同种内切酶生产的粘性末端的连接 GAATTC GAATTC CTTAAG CTTAAG EcoRI 5" G 5 AATTC G 5 AATTC CTTAA 5 G CTTAA 5 G 退火 5" G AATTC G AATTC CTTAA G CTTAA G 5 G AATTC G AATTC CTTAA G CTTAA G 5 T4-DNA ligase GAATTC GAATTC CTTAAG CTTAAG GAATTC GAATTC CTTAAG CTTAAG

同种内切酶生产的粘性末端的连接 5' 5' GAATTC CTTAAG GAATTC CTTAAG EcoRI 5' G CTTAA AATTC G 5' G 5' CTTAA 5' 5' AATTC G 5' 退火 G CTTAA AATTC G 5' G CTTAA 5' AATTC G G CTTAA AATTC G 5' G CTTAA 5' AATTC G T4-DNA ligase GAATTC CTTAAG 5' 5' GAATTC CTTAAG GAATTC CTTAAG 5' 5' GAATTC CTTAAG

同尾酶生产的粘性末端的连接 5" TGATCA GGATCC GGATCC ACTAGT 5 CCTAGG CCTAGG Bcll 5" 5 GATCA 5 GATCC G ACTAG 5 5 G CCTAG 5 退火 5" T GATCC G GATCA ACTAG G CCTAG T 5 T GATCC G GATCA ACTAG G CCTAG T 5 T4-DNA ligase TGATCC GGATCA ACTAGG CCTAGT TGATCC GGATCA ACTAGG CCTAGT

同尾酶生产的粘性末端的连接 BamHI 5' 5' GGATCC CCTAGG GGATCC CCTAGG 5' G CCTAG GATCC G 5' T 5' ACTAG 5' 5' GATCA T 5' 退火 G CCTAG GATCC G 5' T ACTAG 5' GATCA T T4-DNA ligase TGATCC ACTAGG 5' 5' GGATCA CCTAGT 5' TGATCA ACTAGT 5' BclI G CCTAG GATCC G 5' T ACTAG 5' GATCA T TGATCC ACTAGG 5' 5' GGATCA CCTAGT

不同粘性末端的连接 5" CTGCAG 5 GGATCC GGATCC GACGTC 5 CCTAGG CCTAGG Pstl amHI 5" CTGCA 3 5 GATCC G G 3 ACGTC G CCTAG 5 T4-DNA pol 切平 Klenow 补平 5 GATCC GGATC G CTAGG CCTAG 5 T4-DNA ligase CGATCC GGATCG GCTAGG CCTAGC 5 CGATCC GGATCG GCTAGG CCTAGC

不同粘性末端的连接 BamHI 5' 5' GGATCC CCTAGG GGATCC CCTAGG 5' G CCTAG GATCC G 5' CTGCA 5' G 5' G ACGTC 3' T4-DNA ligase CGATCC GCTAGG 5' 5' GGATCG CCTAGC 5' CTGCAG GACGTC 5' PstI 3' T4-DNA pol 切平 5' C G 5' G C Klenow 补平 5' GGATC CCTAG 5' GATCC CTAGG CGATCC GCTAGG 5' 5' GGATCG CCTAGC

人工粘性末端的连接5‘突出末端 5" G 5 AATTC ECoR I 5 GATCC G BamH I CTTAA 5 5 G CCTAG 5 Klenow 补平 Klenow 补平 GAATT 5 AATTC 5'GATCC GGATC CTTAA 5 TTAAG CTAGG CCTAG 5 TdT dGTP TdT dcTP GAATTGGGGGG AATTC GATCC GGATCCCCCCC CTTAA GGGGGGTTAAG CCCCCCCTAGG CCTAG 退火 T4-DNA ligase BamHI BamH I 5 GAATTGGGGGGGATCC GGATCCCCCCCAATTC CTTAACCCCCCCTAGG CCTAGGGGGGGTTAAG 5" GAATTGGGGGGGATCC GGATCCCCCCCAATTC CTTAACCCCCCCTAGG CCTAGGGGGGGTTAAG

人工粘性末端的连接 5‘突出末端 5' G CCTAG GATCC G 5' G 5' CTTAA 5' 5' 5' AATTC G T4-DNA ligase 5' 5' Klenow 补平 Klenow 补平 5' GGATC CCTAG 5' GATCC CTAGG 5' GAATT CTTAA 5' 5' 5' AATTC TTAAG TdT dGTP TdT dCTP GAATTGGGGGG CTTAA AATTC GGGGGGTTAAG GGATCCCCCCC CCTAG GATCC CCCCCCCTAGG GAATTGGGGGGGATCC CTTAACCCCCCCTAGG GGATCCCCCCCAATTC CCTAGGGGGGGTTAAG 5' 5' GAATTGGGGGGGATCC CTTAACCCCCCCTAGG GGATCCCCCCCAATTC CCTAGGGGGGGTTAAG 退火 BamH I EcoR I BamH I BamH I

人工粘性末端的连接3‘突出末端 5" GCATG 3 sph I G CTGCA 3 3 GTACG 3ACGTC G Pst I TdT dcTP TdT dGTP GCATGCCCCCC 3 G CTGCAGGGGGG 3 3 CCCCCCGTACG 3 GGGGGGACGTC G 退火 5 GCATGCCCCCC G CGCAGGGGGG C GGGGGGACGTC G CCCCCCGTACG 5 GCATGCCCCCC CTGCAGGGGGG C GGGGGGACGTC G CCCCCCGTACG 5 Klenow [4-DNA ligase PstI 5" GCATGCCCCCCTGCAG CGCAGGGGGGCATGO CGTACGGGGGGACGTC GACGTCCCCCCGTACG 5" GCATGCCCCCCTGCAG CTGCAGGGGGGCATGO CGTACGGGGGGACGTC GACGTCCCCCCGTACG

人工粘性末端的连接 3‘突出末端 CTGCA 3' G G 3' ACGTC 5' GCATG 3' C 5' C 3' GTACG T4-DNA ligase TdT dCTP TdT dGTP GCATGCCCCCC 3' C 退火 Pst I Pst I C 3' CCCCCCGTACG CTGCAGGGGGG 3' G G 3' GGGGGGACGTC 5' 5' GCATGCCCCCC G C GGGGGGACGTC CTGCAGGGGGG C G CCCCCCGTACG 5' 5' GCATGCCCCCC G C GGGGGGACGTC CTGCAGGGGGG C G CCCCCCGTACG 5' 5' GCATGCCCCCCTGCAG CGTACGGGGGGACGTC CTGCAGGGGGGCATGC GACGTCCCCCCGTACG 5' 5' GCATGCCCCCCTGCAG CGTACGGGGGGACGTC CTGCAGGGGGGCATGC GACGTCCCCCCGTACG Klenow Pst I Sph I