微生物学：细菌的生长和遗传变异（2/4）

考试6 1X、γ线的杀菌机理是什么? 2氧化剂的杀菌机理是什么? 3福尔马林的主要成分是什么? 4乙醇杀菌机理是什么?其最佳杀菌浓 度是多少? 5青霉素的抗菌机理是什么? 6直接计数法的特点是什么?有哪些具 体方法?

考试6 1.X、γ射线的杀菌机理是什么？ 2.氧化剂的杀菌机理是什么？ 3.福尔马林的主要成分是什么？ 4.乙醇杀菌机理是什么？其最佳杀菌浓 度是多少？ 5.青霉素的抗菌机理是什么？ 6.直接计数法的特点是什么？有哪些具 体方法？

4.比浊计数法 n浊细菌悬浮液的浊度 细菌不完全透光,一定范围内菌溶液的混浊度与 菌数量成正比

4．比浊计数法 浊——细菌悬浮液的浊度 细菌不完全透光，一定范围内菌溶液的混浊度与 菌数量成正比

(1)制标准曲线(ODNo) 分光光度法测 浊度仪 浊度 2 3 或721 其他细菌计数法 细菌数量 10100100分光 度仪 细菌数量 制标准曲线 菌液浊度 0(2)测菌液浊度,查图表得出细菌数量

（1）制标准曲线（OD~No） （2）测菌液浊度，查图表得出细菌数量 分光光度法测 浊度 1 2 3 4 其他细菌计数法 细菌数量 10 100 1000 10000 个/mL 细菌数量 制标准曲线 菌液浊度 浊度仪 或721 分光光 度仪

(二)间接计数法(活菌计数法) 提问:前述方法中计数的不都是活菌,如何分辨菌死活? 繁殖 口提问:细菌繁殖的可见现象是什么? 产生菌落(固体培养基培养)、菌液混浊(液体培养基培养) 0计数原理:一个细菌可繁殖成一个菌落或一群细菌 缺点;慢 分固体培养法和液体培养法

（二）间接计数法(活菌计数法) 提问：前述方法中计数的不都是活菌，如何分辨菌死活？ 繁殖 提问：细菌繁殖的可见现象是什么？ 产生菌落（固体培养基培养）、菌液混浊（液体培养基培养） 计数原理：一个细菌可繁殖成一个菌落或一群细菌. 缺点：慢 分固体培养法和液体培养法

01.稀释平板计数法一固体培养法 第一·苗她释 混合 菌样被 无菌水 不同稀 M-o 释倍率 原平板 培养图 得到不同 稀释度 (10x 10 04 菌液

无菌水 1. 稀释平板计数法—固体培养法 第一步：菌样巧妙稀释 1mL 混合 1mL 混合 9mL 10mL 1 ： 10-1 10-1 ： 10-2 10-2 10-3 10-4 10-5 得到不同 稀释度 （10-x） 菌液 菌样被 无菌水 不同稀 释倍率 后平板 培养图

第二步:接种平板 各取1ml,均匀涂布于 -5 冷固体培养基平板上或 10 与温热液态固体培养基 混合冷却。 第三步:培养 每一个细菌会生成一个 菌落 稀释度 量太少 过低, 误差因 菌落密 太大, 集无法 放计数 计数 果

10-2 10 -3 10-4 10 -5 各取1ml，均匀涂布于 冷固体培养基平板上或 与温热液态固体培养基 混合冷却。 第三步：培养 稀 释 度 过 低 ， 菌 落 密 集 无 法 计数 可以计数 ，但数量 过多，费 时费力 数量合 适，统 计计算， 作为结 果 数 量 太 少 ， 误 差 因 素 太 大 ， 不做计数 第二步：接种平板 每一个细菌会生成一个 菌落

一般计数平板的细菌生长菌落数以30-300个为 第四步:均 细菌数量=? 细菌数量出的菌落数 例如:105稀释度时菌落数为125个 细菌数量=125/105=1.25×107个mL 平板让数法是采用最广的一种活菌计数法 如国标法水中细总的测定。。 注意;作空自及取平行样2~3组)均值减小 误差

一般计数平板的细菌生长菌落数以30~300个为 宜。 第四步： 计数 细菌数量=？ 细菌数量=数出的菌落数/稀释度 例如：10-5稀释度时菌落数为125个 细菌数量=125/10-5=1.25×107个/mL 平板计数法是采用最广的一种活菌计数法 如国标法水中细菌总数的测定 。 注意：作空白及取平行样（2～3组）均值减小 误差 平 均

2稀释液体计数法 特点:液体培养、统计学查表计数 又称MPN法(或最可能数法) n Most probable numl 例如测定SRB(硫酸盐还原菌,厌氧)的数量 提问:能用稀释平板法计数吗?为什么? 般不能,厌氧菌暴露在空气中不能生长(除非厌氧 培养箱) 对这类菌可以利用它们生长时产生的硫化亚铁黑色特征进 行深层區氢液体培养,按MPN法进行计数

2.稀释液体计数法 特点：液体培养、统计学查表计数 又称MPN法（或最可能数法） Most Probable Number 例如测定SRB（硫酸盐还原菌，厌氧）的数量 提问：能用稀释平板法计数吗？为什么？ 一般不能，厌氧菌暴露在空气中不能生长（除非厌氧 培养箱） 对这类菌可以利用它们生长时产生的硫化亚铁黑色特征进 行深层隔氧液体培养，按MPN法进行计数

提问:为什么有些试 管变黑有些没有? 10210310103稀释程度、取样概率 (2)稀释接种样品 在液体表面加一层无菌 培养基 液体石蜡隔绝氧气, 9m 103 106 (3)培养 恒温37℃培养14天 记录变黑的试管情况 332

3 3 2 0 10 -4 10-5 10 3 -6 10- 10-2 10-3 10-4 10-5 （1）稀释 （2）稀释接种样品 在液体表面加一层无菌 液体石蜡隔绝氧气， 恒温37℃培养14天 记录变黑的试管情况 （3）培养 1ml + 9ml 培 养 基 提问：为什么有些试 管变黑有些没有？ 稀释程度、取样概率

4)统计一查表一计算 根据不同稀释度变黑试管 0①统计出数量指标 ②查表 0三位数及其中最低稀释度表MPN表 (取变黑的管数最多、稀释度又最低的生长管 数,为第一位数字,后面两个稀释度的生长管 数后两位数) 提问:上例情况而言统计数量是几? 320104

(4)统计－查表－计算 根据不同稀释度变黑试管 ①统计出数量指标 三位数及其中最低稀释度 （取变黑的管数最多、稀释度又最低的生长管 数，为第一位数字，后面两个稀释度的生长管 数后两位数） 提问：上例情况而言统计数量是几？ ②查表 表——MPN表 320 10-4