新乡医学院：《生物材料检验》课程教学资源（实验课件，打印版）实验三 尿中δ-氨基乙酰丙酸的分光光度测定方法

尿中δ-氨基乙酰丙酸的分光光 度测定方法 2016418

[目的] ·了解尿中δ-ALA测定的临床意义。 。 掌握乙酸乙酯萃取-对二甲氨基苯甲醛比色 法测定6-ALA的原理和方法。 20164/18

[原理] ·尿中6-ALA与乙酰乙酸乙酯缩合生成吡咯化合物。 此化合物用乙酸乙酯提取，并与显色剂（对-二甲 氨基苯甲醛)作用生成红色化合物，在波长554 nm处比色定量。 20164/18

[器材] ·分光光度计，10mm比色杯。 ·具塞比色管，10ml. ·离心机。 ·电炉。 ·聚乙烯塑料瓶，100ML。 ·尿比重计。 20164/18

[试剂] 本实验所用试剂除另有说明者外，均为分析纯试剂 实验用水为蒸馏水或具有同等纯度的去离子水。 冰乙酸，p20=1.05g/ml。 高氯酸，p29=1.67g/mL 无水乙酸钠。 对-二甲氨基苯甲醛。 乙酰乙酸乙酯。 乙酸乙醋。 乙酸盐缓冲液(pH=4.6):于700ml水中加入57ml冰乙酸，82g无水乙酸 钠，溶解后加水至1,000ml。 混万 学手冰箱中 片发 布 20164/18

[采样、运输和保存] ·用塑料瓶收集铅作业工人尿样50ml,尽快 带回实验室（夏季运输时最好冷藏），测比重 后，放4℃冰箱可保存二周。 20164/18

[操作步骤] ·1.样品处理 ·1.1分别取1ml尿样于2支10ml具塞比色管 中，各加1ml水，2ml乙酸盐缓冲液，混 匀，其一为样品管，另一为尿样空白管。 ·1.2向样品管中加入0.4ml乙酰乙酸乙酯， 向空白中加入0.4m乙酸盐缓冲液，充分混 匀。 20164/18

2.标准曲线的绘制 ·2.1取6支10ml具塞比色管，按下表配制标准管。 管号 01 2 34 5 6-AA标准应用溶液0.00.10.30.50.71.0 (ml) 水(ml) 2.01.91.71.51.31.0 6-ALA含量（μg) 01.03.05.07.010.0 20164/18

2.标准系列配制 ·用50ml容量瓶；配制方法如下 编号 0123456 1μg/ml 铅标准应用液0.000.250.501.002.003.004.00 (ml) 基体改进剂 10min后，各管均加0.25ml 1%硝酸 定容至刻度 铅含量(g)0.000.250.501.002.003.004.00 20164/18

2.2各管中加入2ml乙酸盐缓冲液，0.4ml乙酰乙 酸乙酯，混匀。 2.3于沸水浴中加热12min,取出冷却至室温。 2.4各加入4ml乙酸乙酯，加塞振摇100次，离 心5min,静置分层。 2.5各取2ml乙酸乙酯提取液于另6支10ml具塞 比色管中，各加2m显色剂，混匀静置10 min在554nm处，用10mm比色杯，以零管 为参比量吸光度。 2.6以吸光度为纵坐标，δ-ALA含量为横坐标， 绘制标准曲线。 20164/18