南京农业大学：《生物化学 Biochemistry》课程教学资源（PPT课件）第七章 酶 Enzyme（7.5）酶的提取纯化与活力测定

第五节酶的提取纯化与活力测定

第五节 酶的提取纯化与活力测定

酶提取基本的方法 酶的分离与提取 A.了解所分离酶在细胞中分布 细胞产生的酶有二类: 1.由细胞内产生后分泌到胞外发挥作用的酶,称为细胞外 酶。这类酶大部分属于水解酶。此类酶通常含量高,容易 得到。 2.在细胞内合成后并不分泌到细胞外,而在细胞内起催化 作用,称为细胞内酶,该类酶在细胞内往往与细胞器结合, 不仅有一定的区域性,而且催化的反应具有一定顺序性

酶提取基本的方法 一.酶的分离与提取 细胞产生的酶有二类： 1. 由细胞内产生后分泌到胞外发挥作用的酶，称为细胞外 酶。这类酶大部分属于水解酶。此类酶通常含量高，容易 得到。 2. 在细胞内合成后并不分泌到细胞外，而在细胞内起催化 作用，称为细胞内酶，该类酶在细胞内往往与细胞器结合， 不仅有一定的区域性，而且催化的反应具有一定顺序性。 A. 了解所分离酶在细胞中分布

酶提取基本的方法 酶的分离与提取 B.材料的获取 在提取某一酶时,首先应当根据需要,选择含 此酶最丰富的材料。由于从动物内脏或植物果实中 提取酶制剂受到原料限制,成本又很大,因此,目 前工业上大多采用培养微生物的方法来获得大量的 酶制剂

B. 材料的获取 在提取某一酶时，首先应当根据需要，选择含 此酶最丰富的材料。由于从动物内脏或植物果实中 提取酶制剂受到原料限制，成本又很大，因此，目 前工业上大多采用培养微生物的方法来获得大量的 酶制剂。 酶提取基本的方法 一.酶的分离与提取

酶提取基本的方法 酶的分离与提取 C.酶分离纯化的主要步骤 1.主要步骤为:抽提、纯化、结晶 抽提:破碎细胞,动植物组织一般可用组织捣碎器; 或者加石英砂研磨,将材料做成丙酮粉或进行冰冻 融解;对细菌,常采用加砂或加氧化铝研磨和超声 波振荡方法破碎。 大多数酶一般都用缓冲液进行抽提,缓冲液的类 型决定于酶的种类和理化特性,抽提液pH最好远离 等电点

C. 酶分离纯化的主要步骤 1.主要步骤为：抽提、纯化、结晶 抽提：破碎细胞，动植物组织一般可用组织捣碎器； 或者加石英砂研磨，将材料做成丙酮粉或进行冰冻 融解 ；对细菌，常采用加砂或加氧化铝研磨和超声 波振荡方法破碎。 大多数酶一般都用缓冲液进行抽提，缓冲液的类 型决定于酶的种类和理化特性，抽提液pH最好远离 等电点 。 酶提取基本的方法 一.酶的分离与提取

酶提取基本的方法 酶的分离与提取 C.酶分离纯化的主要步骤 1.主要步骤:抽提、纯化、结晶 浓缩:抽提液或发酵液中酶浓度往往很低,必须浓 缩富集。常用的浓缩方法有:加中性盐或冷乙醇沉 淀后再溶解,跤过滤浓缩以及超过滤浓缩法等。 纯化:纯化过程就是去除杂质的过程。原则:一方 面是要提高酶的纯度,另一方面却也使酶的总量不 可避免有所损失

C. 酶分离纯化的主要步骤 1.主要步骤：抽提、纯化、结晶 浓缩：抽提液或发酵液中酶浓度往往很低，必须浓 缩富集。常用的浓缩方法有：加中性盐或冷乙醇沉 淀后再溶解，胶过滤浓缩以及超过滤浓缩法等。 纯化：纯化过程就是去除杂质的过程。原则：一方 面是要提高酶的纯度，另一方面却也使酶的总量不 可避免有所损失。 酶提取基本的方法 一.酶的分离与提取

酶提取基本的方法 酶的分离与提取 C.酶分离纯化的主要步骤 1.主要步骤为:抽提、纯化、结晶 结晶:浓缩液经过各种方法的纯化,可得到较纯的 结晶产品

C. 酶分离纯化的主要步骤 1. 主要步骤为：抽提、纯化、结晶 结晶：浓缩液经过各种方法的纯化，可得到较纯的 结晶产品。 酶提取基本的方法 一.酶的分离与提取

酶提取基本的方法 酶的分离与提取 酶分离纯化的主要步骤 2.选择分离纯化方法 a.盐析法(如硫酸胺) b.有机溶剂沉淀法 c层析纯化法(葡聚糖凝胶、阴离子交换层析) d等电点法 e吸附分离法

C. 酶分离纯化的主要步骤 2. 选择分离纯化方法 a.盐析法（如硫酸胺） b.有机溶剂沉淀法 c.层析纯化法（葡聚糖凝胶、阴离子交换层析） d.等电点法 e.吸附分离法 酶提取基本的方法 一.酶的分离与提取

1.酶活力概念 酶活力及其测定 酶活力是酶促反应的能力。酶活力大小 就是指在一定条件所催化的某一化学反应速 度的快慢,即酶催化的反应速度越快,酶活 力越高,反之则表示该酶活力低

1. 酶活力概念 酶活力 是酶促反应的能力。酶活力大小 就是指在一定条件所催化的某一化学反应速 度的快慢，即酶催化的反应速度越快，酶活 力越高，反之则表示该酶活力低。 二.酶活力及其测定

1.酶活力概念 酶活力及其测定 但是,酶的定量并对其蛋白质进行 定量,而是对它的催化能力进行定量。 所以,酶的定量就是测定酶的活力, 也即测定酶促反应的速度

但是，酶的定量并非对其蛋白质进行 定量，而是对它的催化能力进行定量。 所以，酶的定量就是测定酶的活力， 也即测定酶促反应的速度。 1. 酶活力概念 二.酶活力及其测定

1.酶活力概念 酶活力及其测定 如何测定酶活力? 以产物浓度对反应时间作图,可得到酶促反 应速度曲线 物浓 注意:初速度的度 测定是关键,为 什么? 0 时间

如何测定酶活力？ 以产物浓度对反应时间作图，可得到酶促反 应速度曲线 0 产 物 浓 度 时间 注意：初速度的 测定是关键，为 什么？ 1. 酶活力概念 二.酶活力及其测定