重庆医科大学：《分子与细胞》课程教学课件（实验讲稿）细胞骨架染色及光镜特征观察过氧化物酶原位显示

重废警科大学 严谨龙实勤奋进取 CHONGQING MEDICAL UNIVERSITY 细胞骨架染色及光镜特征观察 过氧化物酶原位显示 重庆医科大学基础医学院

细胞骨架染色及光镜特征观察 过氧化物酶原位显示 重庆医科大学 基础医学院

细胞骨架染色及光镜特征观察 一、 实验目的 二、实验原理 三、实验步骤 四、注意事项

细胞骨架染色及光镜特征观察 一、实验目的 二、实验原理 三、实验步骤 四、注意事项

实验目的 p学会细胞骨架显示的实验方法。 p了解光镜下细胞骨架的形态结构

p 学会细胞骨架显示的实验方法。 p 了解光镜下细胞骨架的形态结构。 一、实验目的

二、实验原理 p当细胞用适当浓度的triton“X”一l00溶液处理，能够溶 解质膜结构中及细胞内许多蛋白质，而细胞骨架中的蛋白质 却不被破坏，经固定和考马斯亮兰染色后，胞质背景着色弱， 有利微丝的显示，可在光镜下观察到由微丝组成的纤维束

p 当细胞用适当浓度的triton“X”—100溶液处理，能够溶 解质膜结构中及细胞内许多蛋白质，而细胞骨架中的蛋白质 却不被破坏，经固定和考马斯亮兰染色后，胞质背景着色弱， 有利微丝的显示，可在光镜下观察到由微丝组成的纤维束。 二、实验原理

三、实验步骤 1.洋葱表皮细胞置于小培养皿中用PBS洗涤3次，每次1分钟。 2.置于2%Triton“X”-100液中，室温20分钟，以除掉骨架以外的蛋白质。 3.立即用M缓冲液轻轻地洗涤3次，每次2分钟，使细胞骨架稳定。 4.在3%戊二醛液中固定10分钟，再以PBS液洗3次，每次1分钟，吸去多余 液体。 5.滴加0.2%考马斯亮兰染液染色10分钟，自来水冲洗，制片。 6.低、高倍镜下镜检

三、实验步骤 1.洋葱表皮细胞置于小培养皿中用PBS洗涤3次，每次1分钟。 2.置于2% Triton“X”-100液中，室温20分钟，以除掉骨架以外的蛋白质。 3.立即用M缓冲液轻轻地洗涤3次，每次2分钟，使细胞骨架稳定。 4.在3%戊二醛液中固定10分钟，再以PBS液洗3次，每次1分钟，吸去多余 液体。 5.滴加0.2%考马斯亮兰染液染色10分钟，自来水冲洗，制片。 6.低、高倍镜下镜检

预期结果

预期结果

预期结果 份肥笨

预期结果

四、注意事项 1.注意2%Triton“X”-100处理细胞的时间和温度。 2.考马斯亮兰染液染色之后要用流水冲洗干净

四、注意事项 1. 注意2% Triton“X”-100处理细胞的时间和温度。 2.考马斯亮兰染液染色之后要用流水冲洗干净

过氧化物酶原位显示 一、 实验目的 二、实验原理 三、实验步骤 四、注意事项

过氧化物酶原位显示 一、实验目的 二、实验原理 三、实验步骤 四、注意事项

一、实验目的 p掌握过氧化物酶原位显示方法。 p了解油镜下过氧化物酶的形态结构

p 掌握过氧化物酶原位显示方法。 p 了解油镜下过氧化物酶的形态结构。 一、实验目的