重庆医科大学：《分子与细胞》课程教学课件（实验讲稿）线粒体活体染色及几种细胞器的观察

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线粒体活体染色及几种细胞器的观察 重庆医科大学 基础医学院 程志

主要内容 实验目的 二、实验原理 三、实验步骤 四、注意事项

主要内容 一、实验目的 二、实验原理 三、实验步骤 四、注意事项

实验目的 p掌握线粒体活体染色的原理及方法。 p了解光镜下线粒体基本形态结构。 p了解光镜下中心体、高尔基复合体等细胞器的形态结构特点

p 掌握线粒体活体染色的原理及方法。 p 了解光镜下线粒体基本形态结构。 p 了解光镜下中心体、高尔基复合体等细胞器的形态结构特点。 实验目的

线粒体活体染色

线粒体活体染色

实验原理 p活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内 某些结构，而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。 p詹纳斯绿B(Janus green B)是线粒体的专一性活体染色剂。 线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而 在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态

p 活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内 某些结构，而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。 p 詹纳斯绿 B（Janus green B）是线粒体的专一性活体染色剂。 线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而 在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。 • 实验原理

实验步骤 印·处死兔子、取肝组织细胞：采用空气栓塞法处死兔子，置于解 剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（约2 ~3mm3大小)

实验步骤 p 处死兔子、取肝组织细胞：采用空气栓塞法处死兔子，置于解 剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（约2 ～3mm3大小）。 •

实验步骤 p清洗组织块：将组织块放入盛有Ringer氏液的表面皿内洗去血 液，再用吸管吸去Ringerl氏液。 p染色：在表面皿内滴加詹纳斯绿B染液，染色30分钟。 p制片：染色后，将组织块转移到载玻片上，用镊子将组织块拉碎 去除大组织块，使一些游离的细胞或细胞群从组织块脱离，留在 载玻片上。滴加一滴Ringerl氏液，盖上盖玻片。 p镜检：依次用低、高倍镜观察

p 清洗组织块：将组织块放入盛有Ringer氏液的表面皿内洗去血 液，再用吸管吸去Ringer氏液。 p 染色：在表面皿内滴加詹纳斯绿B染液，染色30分钟。 p 制片：染色后，将组织块转移到载玻片上，用镊子将组织块拉碎， 去除大组织块，使一些游离的细胞或细胞群从组织块脱离，留在 载玻片上。滴加一滴Ringer氏液，盖上盖玻片。 p 镜检：依次用低、高倍镜观察。 实验步骤

兔子肝细胞（示线粒体）

兔子肝细胞（示线粒体）

注意事项 p处死兔子时，要注意安全，避免被免子抓伤。 p清洗组织块时，应尽量将表面的血液清洗干净，避免视野中出现 过多的红细胞。 p染色时，应使组织块的表面露在染液外，这样有利于保持染料的 氧化状态，使线粒体着色。同时，在染色期间要翻动组织块几次 使其各表面均有机会接触空气和染液

p 处死兔子时，要注意安全，避免被兔子抓伤。 p 清洗组织块时，应尽量将表面的血液清洗干净，避免视野中出现 过多的红细胞。 p 染色时，应使组织块的表面露在染液外，这样有利于保持染料的 氧化状态，使线粒体着色。同时，在染色期间要翻动组织块几次， 使其各表面均有机会接触空气和染液。 注意事项

几种细胞器的观察

几种细胞器的观察