湖南农业大学：《生化与分子生物学》课程教学课件（PPT讲稿）第6章 核酸的酶促降解和核苷酸代谢

第大章核酸的酶促降解和核苷酸代榭 本章讨论核酸酶的类别和特点，对核苷酸 的生物合成和分解代谢作一般介绍。 第一节 核酸的酶促降解 第二节 核苷酸的分解代谢 第三节 核苷酸的合成代谢

第六章 核酸的酶促降解和核苷酸代谢 本章讨论核酸酶的类别和特点，对核苷酸 的生物合成和分解代谢作一般介绍。 第一节 核酸的酶促降解 第三节 核苷酸的合成代谢 第二节 核苷酸的分解代谢

第一节 核酸的酶促降解 核酸酶 核苷酸酶 核苷磷酸化酶 核酸→核苷酸 核苷 +碱基十戊糖-1-P 磷酸 核酸酶 二、限制性内物酶 国

第一节 核酸的酶促降解 一、核酸酶 二、限制性内切酶 核酸酶 核苷酸酶 核苷磷酸化酶 核酸 核苷酸 核苷 碱基+戊糖-1-P 磷酸

核酸酶 1、核酸酶的分类 核糖核酸酶(RNase) (1)根据对底物的 脱氧核糖核酸酶(DNase) 专一性分为 非特异性核酸酶 核酸内切酶 (2)根据切割位点分为 核酸外切酶 2、核酸酶的作用特点 国

核 酸 酶 1、核酸酶的分类 （1）根据对底物的 专一性分为 （2）根据切割位点分为 核糖核酸酶(RNase) 脱氧核糖核酸酶(DNase) 非特异性核酸酶 核酸内切酶 核酸外切酶 2、核酸酶的作用特点

外)核酸酶对核酸的水解位点 ②3 牛牌磷酸二酯酶 蛇毒磷酸二酯酶 (5'端外切5得3) (3端外切3得5)

外切核酸酶对核酸的水解位点 5´ p p p p OH B p p p p 3´ B B B B B B B 牛脾磷酸二酯酶 （ 5´端外切5得3） 蛇毒磷酸二酯酶 （ 3´端外切3得5）

内切核酸酶对RNA的水解位点示意图 Py Pu Py a小小小a小小 RNAase I RNAase I RNAase T RNAase T Pu:嘌岭 Py:嘧啶 国

内切核酸酶对RNA的水解位点示意图 5´ p p p p OH Py Pu Py Py 1´ p p p G A C U p p p G A 3´ RNAase I RNAase I RNAase T1 RNAase T1 Pu ：嘌呤 Py：嘧啶

限制性内吻酶 原核生物中存在着一类能识别外源DNA双螺旋中4-8个碱基 对所组成的特异的具有二重旋转对称性的回文序列，并在此序 列的某位点水解DNA双螺旋链，产生粘性末端或平末端，这类 酶称为限制性内切酶(ristriction endonuclease)。 类型 ·命名 ●意义 国

限制性内切酶 • 类型 • 命名 • 意义 原核生物中存在着一类能识别外源DNA双螺旋中4-8个碱基 对所组成的特异的具有二重旋转对称性的回文序列，并在此序 列的某位点水解DNA双螺旋链，产生粘性末端或平末端，这类 酶称为限制性内切酶（ristriction endonuclease）

常用的DNA限制性内切酶的专一性 酶 辨认的序列和切口 说明 .AGCT. Alu I .TCGA. 四核苷酸，平端切口 Bam HI ·.GGATCC·. .CCTAGG. 六核苷酸，粘端切口 Bgl I .AGATCT. .TCTAGA. 六核苷酸，粘端切口 Eco R I ·.GAATTC. 六核苷酸，粘端切口 .CTTAAG. HindⅢ .AAGCTT. 六核苷酸，粘端切口 .TTCGAA. SalI .GTCGAC. 六核苷酸，粘端切口 ·.CAGCTG. Sma I .CCCGGG·. 六核苷酸，平端切口 ·.GGGCCC

常用的DNA限制性内切酶的专一性 酶 辨认的序列和切口 说明 ‥ ‥A G C T ‥‥ ‥ ‥T C G A ‥ ‥ ‥ ‥G G A T C C ‥‥ ‥ ‥C C T A G G ‥‥ ‥ ‥A G A T C T ‥‥ ‥ ‥T C T A G A ‥‥ ‥ ‥G A A T T C ‥‥ ‥ ‥C T T A A G ‥‥ ‥ ‥A A G C T T‥‥ ‥ ‥T T C G A A ‥‥ ‥ ‥G T C G A C ‥‥ ‥ ‥C A G C T G ‥‥ ‥ ‥C C C G G G ‥‥ ‥ ‥G G G C C C ‥‥ Bam H I Alu I Bgl I Eco R I Hind Ⅲ Sal I Sma I 四核苷酸，平端切口 六核苷酸，平端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口

BamHI Pvu I Kpn I GGATCC CAGCTG GGTACC CCTAGG GTCGAC CCATGG G3' 5GATCC CAG3 5CTG GTAC3' 5'C CCTAGS' 3G GTC5 3GAC C 3CATG 5粘性末端 平齐末端 3粘性末端 图11-4 三种不同类型限制性内切酶切割示意图

DNA 1 DNA2 GAATTO GAATTC CT竹AAG CTTAAG EcoRI EcoRI G AATTC CTTAA CTTAA DNA片段退火并由 DNA连接酶连接 GAATTC GAAT王Q CA闪G CTT AA 重组DNA分子 用限制酶创建重组DNA

限制性内物酶类型 1型：分子量大于105，多亚基，需S-线苷蛋氨酸、ATP 和Mg+，识别位点与切割位点相差甚远，产物为异质，是限 制与修饰相排斥的多功能酶. Ⅱ型：分于量小于105，需Mg+,切割位点位于识别 位点上，产物为专一性片段，不具修饰酶功能。现在分子生 物学研究所用的限制性内物酶均为此类。 ⅡI型：识别位点为5-7b的非对称序列，切割位点在 顺序之外离识别序列5-10bp,切割双链，个别也切割单链。 是限制与修饰相多功能晦

限制性内切酶类型 I型：分子量大于105，多亚基，需S-线苷蛋氨酸、ATP 和Mg2+ ，识别位点与切割位点相差甚远，产物为异质，是限 制与修饰相排斥的多功能酶. Ⅱ型：分子量小于105，需Mg2+ ，切割位点位于识别 位点上，产物为专一性片段，不具修饰酶功能。现在分子生 物学研究所用的限制性内切酶均为此类。 ⅡI型：识别位点为5-7bp的非对称序列，切割位点在 顺序之外离识别序列5-10bp，切割双链，个别也切割单链。 是限制与修饰相多功能酶