石河子大学：《实验诊断学》课程教学资源（PPT课件讲稿）血涂片的制作、白细胞分类计数

实验诊断学 实验二

实验诊断学 实验二

一、血涂片的制作

一、血涂片的制作

(一)实验目的 ■1.掌握血涂片的制作方法 ■2.了解瑞氏染色原理

（一）实验目的 ◼ 1.掌握血涂片的制作方法 ◼ 2.了解瑞氏染色原理

(二)染色原理 血涂片经Wright染色后进行分类计数。细胞受色 包括物理吸附与化学亲和作用。酸性染料伊红与 细胞中的碱性物质如血红蛋白，嗜酸性颗粒结合， 使其染成红色；碱性染料美蓝与细胞中的酸性物 质如核染色质、嗜碱性颗粒、血小板及富含核蛋 白的胞质结合，使其染成兰色。介于两者之间的 中性物质如白细胞染色质、中性粒细胞颗粒及血 小板颗粒区染成紫色。由于不同细胞的成分不同， 对两种染料结合的多少也不同，而使各种细胞呈 现出各自的染色特点

（二）染色原理 ◼ 血涂片经Wright染色后进行分类计数。细胞受色 包括物理吸附与化学亲和作用。酸性染料伊红与 细胞中的碱性物质如血红蛋白，嗜酸性颗粒结合， 使其染成红色；碱性染料美蓝与细胞中的酸性物 质如核染色质、嗜碱性颗粒、血小板及富含核蛋 白的胞质结合，使其染成兰色。介于两者之间的 中性物质如白细胞染色质、中性粒细胞颗粒及血 小板颗粒区染成紫色。由于不同细胞的成分不同， 对两种染料结合的多少也不同，而使各种细胞呈 现出各自的染色特点

(三)实验器材 ■器材：毛细血管采血用具和消毒剂、载玻 片和推片、染色用杯和支架、光学显微镜、 特种铅笔、擦镜纸、香柏油、二甲苯 ■ 试剂： Wright染色液 磷酸盐缓冲液

◼ 器材：毛细血管采血用具和消毒剂、载玻 片和推片、染色用杯和支架、光学显微镜、 特种铅笔、擦镜纸、香柏油、二甲苯 ◼ 试剂： Wright染色液 ◼ 磷酸盐缓冲液 （三）实验器材

Wright染色液 1.瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem b1ue)和酸性染料黄色伊红（Eostm Y) 合称伊红美蓝染料即瑞氏（美蓝一伊红Y) 染料。 伊红钠盐的有色部分为阴离子，.无色部分 为阳离子，其有色部分为酸性，、故称伊红为 酸性染料。美蓝通常为氯盐是碱性的，美蓝 的中间产物结晶为三氯化镁复盐，其有色部 分为阳离子，无色部分为阴离子，恰与伊红 钠盐相反

Wright染色液 1.瑞氏染料是由碱性染料美蓝（ Methvlem blue ）和酸性染料黄色伊红（ Eostm Y ） 合称伊红美蓝 染料即瑞氏 （美蓝－伊红Y） 染料。 伊红钠盐的有色部分为阴离子，无色部分 为阳离子，其有色部分为酸性，故称伊红为 酸性染料。美蓝通常为氯盐是碱性的，美蓝 的中间产物结晶为三氯化镁复盐，其有色部 分为阳离子，无色部分为阴离子，恰与伊红 钠盐相反

2 。用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇 是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用： (1)甲醇使瑞氏染料中美蓝(M)与伊红(E 在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的 有色物质而着色。 在配制的瑞民染液中美蓝如放置过久即可氧化而 含有天青，美蓝关青与伊红化合物能使核染成紫 红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余美蓝就可以 使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子 彼此结合的反应。 (2)甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在 一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对 染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水， 使染色液升温，加速染色反应

2 ．用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇 是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用： （ 1 ）甲醇使瑞氏染料中美蓝（ M ）与伊红（ E ） 在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的 有色物质而着色。 在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而 含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫 红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余 美蓝就可以 使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子 彼此结合的反应。 （ 2 ）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在 一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对 染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水， 使染色液升温，加速染色反应

缓冲液： 缓冲液作用：染色对氢离子浓度是十分敏感 的，据观察pH值的改变，可使蛋白质与染料 形成的化合物重新离解。缓冲液须保持一 定的pH使染色稳定，PBS的pH一般在6.4- 6.8,偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和 作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中 和作用，使pH恒定

缓冲液： 缓冲液作用：染色对氢离子浓度是十分敏感 的，据观察pH值的改变，可使蛋白质与染料 形成的化合物重新离解。缓冲液须保持 一 定的 pH 使染色稳定,PBS的pH一般在 6.4- 6.8 ，偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和 作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中 和作用，使 pH 恒定

(四)实验步骤 1.采血 采血前用70%酒精棉球消毒人的指腹，干后 用采血针刺破指腹皮肤；动物采血时先将耳 部剪毛，酒精消毒后，刺破动物耳部皮肤， 挤去第一滴血不要（因含单核细胞较多）

（四）实验步骤 1．采血 采血前用70%酒精棉球消毒人的指腹，干后 用采血针刺破指腹皮肤；动物采血时先将耳 部剪毛，酒精消毒后，刺破动物耳部皮肤， 挤去第一滴血不要（因含单核细胞较多）

-、用蘸有体积分数为5%的酒精的脱脂 二、用已消毒的针尖刺陂指尖的皮肤。 棉，对将要取血的部位（如指尖）进 行消毒