遵义医科大学附属医院医学检验科：《临床分子生物学检验技术》课程教学资源（课件讲稿）第六章 李彦核酸实时定量检测技术

第六章 核酸实时定量检测技术 医学检验学院李彦

第六章 医学检验学院 李彦 核酸实时定量检测技术

章节介绍2学时 实时荧光定量PCR的 实时荧光定量PCR引物和 1/ 基本原理（掌握） 2 探针的设计（熟悉） 实时荧光定量PCR反应体 实时荧光定量PCR测定 3 系和条件的优化（熟悉） 4 的数据分析（掌握） 临床基因扩增实验室的设 5 置与人员资质要求（了解）

实时荧光定量PCR的 1 基本原理（掌握） 实时荧光定量PCR引物和 2 探针的设计（熟悉） 实时荧光定量PCR反应体 3 系和条件的优化（熟悉） 实时荧光定量PCR测定 4 的数据分析（掌握） 临床基因扩增实验室的设 5 置与人员资质要求（了解） 章节介绍 2学时

222222 What is real time Q-PCR? Why do real time Q-PCR? How to do real time Q-PCR?

How to do real time Q-PCR？ Why do real time Q-PCR？ What is real time Q-PCR？

基本概念（掌握） WHA 实时荧光定量PCR(rea-time fluorescence quantitative-PCR,real tiam Q-PCR):是在常规PCR基 础上加入荧光基团，利用荧光信号随着PCR反应的积累 来实时监控PCR反应的进程，并通过分析软件对PCR的 反应进行检测分析的技术。 荧光基团 Tag DNA聚合酶 棋板DNA dNTPS Primer

基本概念（掌握） 实 时 荧 光 定 量 PCR （ real-time fluorescence quantitative-PCR，real tiam Q-PCR）:是在常规PCR基 础上加入荧光基团，利用荧光信号随着PCR反应的积累 来实时监控PCR反应的进程，并通过分析软件对PCR的 反应进行检测分析的技术。 Mg2+ dNTPS Taq DNA聚合酶 Primer 模板DNA 荧光基团

NHY 实时荧光定量PCR与常规PCR的区别 常规PCR 实时荧光定量PCR 需要后处理，开管操 无需后处理，闭管操 作，易造成污染。 作、降低污染。 对PCR扩增反应的终 实时监测PCR扩增， 对起始模板进行定量 产物进行半定量分析。 分析。 人工分析结果，操作 仪器自动分析，操作 复杂，存在误差。 简单，敏感性、重复 性和特异性强

需要后处理，开管操 作，易造成污染。 对PCR扩增反应的终 产物进行半定量分析。 人工分析结果，操作 复杂，存在误差。 无需后处理，闭管操 作、降低污染。 实时监测PCR扩增， 对起始模板进行定量 分析。 仪器自动分析，操作 简单，敏感性、重复 性和特异性强。 常规PCR 实时荧光定量PCR 实时荧光定量PCR与常规PCR的区别

NHY 实时荧光定量PCR与常规PCR的区别 由于扩增效率的差异，使得相同的样品 扩增结果存在很大的差异

实时荧光定量PCR与常规PCR的区别 由于扩增效率的差异，使得相同的样品 扩增结果存在很大的差异

NHY 实时荧光定量PCR与常规PCR的区别 常规PCR 实时荧光定量PCR 需要后处理，开管操 无需后处理，闭管操 作，易造成污染。 作、降低污染。 对PCR扩增反应的终 实时监测PCR扩增， 产物进行半定量分析。 对起始模板进行定量 分析。 人工分析结果，操作 仪器自动分析，操作 复杂，存在误差。 简单，重复性强。 可以进行多重扩增

需要后处理，开管操 作，易造成污染。 对PCR扩增反应的终 产物进行半定量分析。 人工分析结果，操作 复杂，存在误差。 无需后处理，闭管操 作、降低污染。 实时监测PCR扩增， 对起始模板进行定量 分析。 仪器自动分析，操作 简单，重复性强。 可以进行多重扩增。 常规PCR 实时荧光定量PCR 实时荧光定量PCR与常规PCR的区别

NHY 实时荧光定量PCR的应用 01 病毒、病原体检测。 02 疾病基因检测/遗传病的产前诊断。 03 肿瘤治疗中癌基因的检测。 04 个体识别、亲子关系鉴别、法医物证

01 病毒、病原体检测。 02 03 肿瘤治疗中癌基因的检测。 疾病基因检测 / 遗传病的产前诊断。 04 个体识别、亲子关系鉴别、法医物证。 实时荧光定量PCR的应用

how 实时荧光定量PCR的基本原理 (掌握)

1 实时荧光定量PCR的基本原理 （掌握）

一、实时荧光定量PCR中常用概念（掌握） B D 扩增 荧光 扩增 曲线 阈值 Ct值 效率

A 扩增 曲线 B 荧光 阈值 C Ct值 D 扩增 效率 一、实时荧光定量PCR中常用概念（掌握）