河北科技大学：《细胞生物学》课程教学资源（PPT课件）第三章 研究方法 Techniques for Cell Biology（生物化学分析技术、其它实验性操作技术）

Chapter3-2 Teehniques for Cell Biology

Chapter3-2 Techniques for Cell Biology

第二节 生物化学分析技术 组织化学和细胞化学技术 组织化学和细胞化学染色方法(histochemical and cytochemical staining method)依据化学反应原理，对 无色透明细胞的某些成分进行定性和定位研究。 细胞化学染色是利用集色剂可同细胞的某种成 得发生反应而看色的原理，从而得以对某种成得 进行研完和分析。 利用这种方法对细胞的各种成分几乎都能显示，包 括无机物、醛、蛋白质、糖类、脂类、核酸、酶等

组织化学和细胞化学染色方法(histochemical and cytochemical staining method)依据化学反应原理，对 无色透明细胞的某些成分进行定性和定位研究。 利用这种方法对细胞的各种成分几乎都能显示，包 括无机物、醛、蛋白质、糖类、脂类、核酸、酶等。 细胞化学染色是利用染色剂可同细胞的某种成 份发生反应而着色的原理，从而得以对某种成份 进行研究和分析

最典型的组积化学墨示法是Feulgen反寇 是示法Feulgen reaction)。此法由Feulgen和 Rossenbeck(1924)发明，对DNA的攻寇具有 高意专一性。 其原理是：标本经稀盐酸水解后，DNA 窃子中的缥岭碱基被解离，从而在核糖的一 端出现了醛基。Schiff试剂中的无色品红与 醛基反应。形成含有醌基的化合物，酿基为 发色团，呈现出紫红色

最典型的组织化学显示法是Feulgen反应 显示法(Feulgen reaction)。此法由Feulgen和 Rossenbeck (1924)发明，对DNA的反应具有 高度专一性。 其原理是: 标本经稀盐酸水解后，DNA 分子中的嘌呤碱基被解离，从而在核糖的一 端出现了醛基。Schiff试剂中的无色品红与 醛基反应，形成含有醌基的化合物，醌基为 发色团，呈现出紫红色

免度细胞化学(immunocytochemistry）. 免疫细胞化学是根据免疫学原理，利用 杭体同特定杭原结合，对抗原进行专一定 位测定的技术。 VH Antigen C.1 轻链 C,2 二硫键 重链

免疫细胞化学是根据免疫学原理，利用 抗体同特定抗原结合，对抗原进行专一定 位测定的技术

抗原肽 0 抗原肽 V V

必果将抗依结合上标记物，系与 组积中的杭原发生反应，即可在光镜 或电镜下显示出孩杭原存在于组积中 的部位

如果将抗体结合上标记物，再与 组织中的抗原发生反应，即可在光镜 或电镜下显示出该抗原存在于组织中 的部位

常用的标记物有荧光素和酶： 标记荧光素的称为免疫荧光法 (immunofluorescent technique),常用的萤光素 有异硫氰酸荧光素FITC),罗丹明(rhodamine)等。 标记酶的称为酶标免疫法(enzyme-labe1led antibody method),常用的酶有辣根过氧化物酶 (horseradish peroxidase)等，酶与底物发生反应 后形成不透明的沉积物或有色物，从而显示出抗原 的存在部位

常用的标记物有荧光素和酶： 标 记 荧 光 素 的 称 为 免 疫 荧 光 法 (immunofluorescent technique)，常用的萤光素 有异硫氰酸荧光素(FITC)、罗丹明(rhodamine)等。 标记酶的称为酶标免疫法(enzyme-labelled antibody method)，常用的酶有辣根过氧化物酶 (horseradish peroxidase)等，酶与底物发生反应 后形成不透明的沉积物或有色物，从而显示出抗原 的存在部位

杭体与杭原的结合方法可分尚以下两种： 将带有标记的抗体与 抗原反应，显示出抗 ©直接法。O○ 原存在的部位 ©间接法 在抗体抗原初级反应的基础上， 再用带标记的次级抗体与初级抗 体反应，从而使初级反应得到放 大，增强显示效果

抗体与抗原的结合方法可分为以下两种： ☺直接法 ☺间接法

免疫荧光技术 不同荧光染料 不同荧光染料 标记 标记 抗 体 抗体2 特异佳结合 不同荧光粮料二 抗原 间接免疫荧光 (细胞的蛋白质成分) 直接免疫荧光 直接荧光染色

不同荧光染料 标记 抗 体 特异性结合 免疫荧光技术 抗原 (细胞的蛋白质成分) 不同荧光染料 直接荧光染色 直接免疫荧光 抗 体2 标记 间接免疫荧光 不同荧光染料

concentratec GFP-cadherin