上海中医药大学：《免疫学技术的原理与方法》课程教学资源（PPT课件）免疫标记技术及应用

免藏标记发术

第一节 免疫标记技术的基本概念 免疫标记与标记免疫的概念 二、常用的免疫标记物质

第一节 免疫标记技术的基本概念 一、免疫标记与标记免疫的概念 二、常用的免疫标记物质

免疫标记与标记免疫 免疫标记技术 标记物与免疫活性物质的联接技术 标记免疫技术： 以标记免疫物质检测相应靶物质的技术

免疫标记与标记免疫 免疫标记技术： 标记物与免疫活性物质的联接技术 标记免疫技术： 以标记免疫物质检测相应靶物质的技术

常用的免变标记物质 类别 标记物 用途 荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化 镧系元素螯合物 免疫分析测定 放射性核素3H、14C、2P、57Gr 免疫分析测定 125I、131I 酶 HRP、AP 免疫组化 免疫分析测定 化学发光物Luminol、lucigenin 免疫分析测定 金属颗粒 胶体金、铁蛋白 免疫组化 免疫分析测定

常用的免疫标记物质 类别 标记物 用途 荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化 镧系元素螯合物 免疫分析测定 放射性核素 3H、 14C、 32P、 57Gr 免疫分析测定 125I、 131I 酶 HRP、AP 免疫组化 免疫分析测定 化学发光物 Luminol、lucigenin 免疫分析测定 金属颗粒 胶体金、铁蛋白 免疫组化 免疫分析测定

第二节 酶标记技术 一、常用标记方法 二、标记免疫物的分离与鉴定

第二节 酶标记技术 一、常用标记方法 二、标记免疫物的分离与鉴定

常用标记方法 1、常用酶 辣根过氧化物酶(HRP) 碱性磷酸酶(AP) 2、标记方法 戊二醛交联法 过碘酸盐氧化法

常用标记方法 1、常用酶 辣根过氧化物酶（HRP） 碱性磷酸酶（AP） 2、标记方法 戊二醛交联法 过碘酸盐氧化法

戊二醛交联法（一步法） 抗体-NH2+COH(CH2)3COH+NH2酶 抗体-NH2=CH-(CH2)3CH=NH2-酶 抗体-NH2=CH-(CH2)CH=NH2-抗体 酶-NH2=CH-(CH2)3-CH=NH2-酶

戊二醛交联法 (一步法） 抗体-NH2 + COH-（CH2）3-COH + NH2-酶 抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶 抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-抗体 酶-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶

戊二醛交联法（二步法) COH-(CH2)3COH+NH2-酶 抗体-NH2+CHO-(CH2)3-CH=NH2-酶 抗体-NH2=CH-(CH2)3CH=NH2-酶

戊二醛交联法（二步法） COH-（CH2）3-COH + NH2-酶 抗体-NH2 + CHO-（CH2）3-CH = NH2-酶 抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶

过碘酸盐氧化法 NalO 酶-五炭糖环 +NH2抗体 NaBH OH OH OH 抗体 抗体 抗体 Schiff碱

过碘酸盐氧化法 O O O O O O NaIO4 O O OH O O OH OH + NH2抗体 O O O N N 抗体 抗体 H2O N 抗体 NaBH4 Schiff碱 酶-五炭糖环

标记免变物的分离与鉴定 1、分离 目的：去除游离酶 方法：盐析、柱层析 2、鉴定 抗体活性 酶活性 标记物纯度

标记免疫物的分离与鉴定 1、分离 目的：去除游离酶 方法：盐析、柱层析 2、鉴定 抗体活性 酶活性 标记物纯度