《生化技术》课程教学资源（PPT课件讲稿）第九章 生物检测技术

第九章生物检测技术 ◆采用生物体对被检测物质的特有反应而 鉴定被检测物质的质量和功效的方法。 ◆生物体主要是各种微生物和某些动物。 ◆检测范围:生物效价和安全性实验

第九章 生物检测技术  采用生物体对被检测物质的特有反应而 鉴定被检测物质的质量和功效的方法。  生物体主要是各种微生物和某些动物。  检测范围：生物效价和安全性实验

Q一生物检测的主要内容 ◆生物检测常用标准样晶对照法 ◆国际标准样品—联合国世界卫生组织 生物检定委员会,丹麦哥本哈根血清所, 伦敦国家医研所 ◆国家标准(参考标准)—本国制备, 用国际标样校合,北京药品与生物制品 研究所 ◆实验室对照样品—本室制备,要与国 家标样、国际标样校合

一 生物检测的主要内容  生物检测常用标准样品对照法  国际标准样品——联合国世界卫生组织 生物检定委员会，丹麦哥本哈根血清所， 伦敦国家医研所  国家标准（参考标准）——本国制备， 用国际标样校合，北京药品与生物制品 研究所  实验室对照样品——本室制备，要与国 家标样、国际标样校合

生物效价测定 ◆效价:指某一物质引起生物反应的功效单位 可用理化方法检测,也可用生物检测方法测定。 生物法:各类抗生素,维生素及氨基酸等生长 因子。 ◆一个青霉素效价单位:能在50mL肉汤培养基 中完全抑制金色葡萄球菌发育的最小青霉素剂 ◆一个链霉素效价单位:能在1mL肉汤培养基中 完全抑制大肠杆菌发育的最小链霉素剂量。 ◆国际标准单位I,对纯的化学物质,可用重量 来表示,如1mg链霉素能抑制1000mL培养基中 大肠杆菌的繁殖,则含有1000U,1U=1ug

1 生物效价测定  效价：指某一物质引起生物反应的功效单位， 可用理化方法检测，也可用生物检测方法测定。  生物法：各类抗生素，维生素及氨基酸等生长 因子。  一个青霉素效价单位：能在50mL肉汤培养基 中完全抑制金色葡萄球菌发育的最小青霉素剂 量。  一个链霉素效价单位：能在1mL肉汤培养基中 完全抑制大肠杆菌发育的最小链霉素剂量。  国际标准单位IU，对纯的化学物质，可用重量 来表示，如1mg链霉素能抑制1000mL培养基中 大肠杆菌的繁殖，则含有1000IU，1IU=1μ g

Q2安全性试验 ◆(1)毒性试验:常用动物进行实验 ◆LD (2)局部刺激性试验 ◆将被检药物注射进动物体内,观察在注射部位 是否出现炎症或产生过敏反应等局部刺激现象 阳性—不能临床使用 阴性—可供临床使用 (3)溶血实验 ◆检测药物是否引起红血球膜破裂而释放出血红 蛋白

2 安全性试验  （1）毒性试验：常用动物进行实验  LD50  （2）局部刺激性试验  将被检药物注射进动物体内，观察在注射部位 是否出现炎症或产生过敏反应等局部刺激现象。  阳性——不能临床使用 阴性——可供临床使用  （3）溶血实验  检测药物是否引起红血球膜破裂而释放出血红 蛋白

(4)热原试验 ◆检测药物中有没有使动物体温升高的致热性物 质存在 般用家兔试验 (5)过敏试验 ◆检测药物中有无引起过敏反应的物质存在的 种方法。 ◆过敏反应 ◆致敏原 般豚鼠或雄性小白鼠试验 (6)变异原试验 ◆检测药物或食物中有没有引起生物产生变异的 物质(变异原)存在。可用动物和微生物检测

 （4）热原试验  检测药物中有没有使动物体温升高的致热性物 质存在  一般用家兔试验  （5）过敏试验  检测药物中有无引起过敏反应的物质存在的一 种方法。  过敏反应  致敏原  一般豚鼠或雄性小白鼠试验  （6）变异原试验  检测药物或食物中有没有引起生物产生变异的 物质（变异原）存在。可用动物和微生物检测

二抗生素的生物检测 (生长抑制剂生物效价检测) ◆有些可以用化学检测或光学检测法进行 检测,广泛采用生物检测法。 ◆利用抗生素对特定微生物的生长起抑制 作用而进行检测的技术。 ◆可用于已知抗生素的效价测定,也可用 于检出未知的抗生素。 ◆方法:稀释法,扩散法

二 抗生素的生物检测 （生长抑制剂生物效价检测）  有些可以用化学检测或光学检测法进行 检测，广泛采用生物检测法。  利用抗生素对特定微生物的生长起抑制 作用而进行检测的技术。  可用于已知抗生素的效价测定，也可用 于检出未知的抗生素。  方法：稀释法，扩散法

Q1稀释法 ◆将样品和标准抗生素分别进行不同稀释度的稀 释,加入培养基中,用指定的适当的菌株接种, 培养后比较微生物的生长情况,从而测定样品 的效价。 ◆固体平板,接入相同量指示菌,比较生长菌落 数 ◆液体培养基,接入相同量指示菌,比较OD值。 ◆还可测抗生素的最低抑菌浓度和半致死剂量 LD5o

1 稀释法  将样品和标准抗生素分别进行不同稀释度的稀 释，加入培养基中，用指定的适当的菌株接种， 培养后比较微生物的生长情况，从而测定样品 的效价。  固体平板，接入相同量指示菌，比较生长菌落 数；  液体培养基，接入相同量指示菌，比较OD值。  还可测抗生素的最低抑菌浓度和半致死剂量 LD50

Q2扩散法 ◆利用扩散作用形成连续的浓度梯度,试验菌在 最低抑菌浓度范围内生长受阻,形成抑菌圈, 从抑菌圈直径测定抗生素效价 ◆用标准品作对照,选择在试验菌最适生长条件 下培养。 (1)纸片一平板法(纸碟法) ◆(2)圆筒一平板法(管碟法、杯碟法) ◆应用最广泛的生物检测法 ◆双层平板 ◆标准曲线或计算得到样品效价

2 扩散法  利用扩散作用形成连续的浓度梯度，试验菌在 最低抑菌浓度范围内生长受阻，形成抑菌圈， 从抑菌圈直径测定抗生素效价。  用标准品作对照，选择在试验菌最适生长条件 下培养。  （1）纸片－平板法（纸碟法）  （2）圆筒－平板法（管碟法、杯碟法）  应用最广泛的生物检测法  双层平板  标准曲线或计算得到样品效价

(3)双层试管法 ◆试管含试验菌及指示剂美蓝(最终浓度lppm) 琼脂培养基,垂直放置,加入标准液和样品液 培养后测定蓝色抑菌带高度,利用标准曲线可 得样品效价。 ◆(4)生物生长图谱法 ◆样品液进行纸层析,层析后风干平铺在含试验 菌平板上,4℃几小时,取去滤纸,37℃16 18h,得到生长图谱,可检测样品中的抗生素 或抑菌物质种类,并可得R 也可用薄层层析分离后测定

 （3）双层试管法  试管含试验菌及指示剂美蓝（最终浓度1ppm） 琼脂培养基，垂直放置，加入标准液和样品液， 培养后测定蓝色抑菌带高度，利用标准曲线可 得样品效价。  （4）生物生长图谱法  样品液进行纸层析，层析后风干平铺在含试验 菌平板上，4℃ 几小时，取去滤纸，37 ℃16～ 18h，得到生长图谱，可检测样品中的抗生素 或抑菌物质种类，并可得Rf  也可用薄层层析分离后测定

生长促进物质的生物检测 生长促进物质:对生物生长繁殖有促进 作用或不可欠缺的物质,如维生素、氨 基酸、激素等。 ◆一般以微生物为试验材料 ◆方法: ◆1生长抑制物质生物检测方法均可用于 生长促进物质的检测 全合成培养基(不含待测物) 结果通过长菌直径或长菌高度而测定

三 生长促进物质的生物检测  生长促进物质：对生物生长繁殖有促进 作用或不可欠缺的物质，如维生素、氨 基酸、激素等。  一般以微生物为试验材料  方法：  1 生长抑制物质生物检测方法均可用于 生长促进物质的检测 全合成培养基（不含待测物） 结果通过长菌直径或长菌高度而测定