北京化工大学：《仪器分析》课程教学资源（实验指导）研究型实验

不同提取方法测定葛根中三种有效成分 一、实验目的及意义 1.了解水煮法、醇提法、微波辅助萃取法、超声波法、索氏提取法和溶剂浮选法： 2.熟悉相关仪器的使用操作。 二、研究背景简介 葛根为临床常用中药，具有解肌退热、升阳透疹、生津止泻的功效。葛根的主 要活性成分是葛根素、大豆甙、大豆甙元等多种异黄酮类物质。并含有多糖及多种 微量元素，现代药理研究表明，葛根黄酮具有改善心脑血液循环，扩张冠状动脉， 降血压，降血糖等作用：大豆武元有明显抗心律失常作用，一直白血细胞的增殖及 黑色素瘤细胞的分化。民间常用葛根一味退热生津。近几年临床上应用含葛根的的 制剂愈风宁心片、葛根素注射液等治疗偏头痛、高血压、冠心病等疾病。目前正在 研制的还有葛根黄铜生物粘附性缓释片、葛根黄铜缓释胶囊、葛根素微乳、葛根素 滴丸、葛根素复合骨架稀释片、配方颗粒等。由于葛根属于药食同源，也被广泛的 应用于保健品和食品中。 本课题对湖南和安徽两个地区的葛根采用水煮法、超声提取法、醇提法、微波 辅助萃取法、索氏提取法、溶剂浮选法的提取方法，并针对其三种有效成分葛根 素、大豆武、大豆武元的HPLC测定结果进行了分析比较。 三、实验内容 1.主要仪器 安捷伦液相色谱仪1100系列（美国安捷伦公司） AB204-N电子天平（瑞士梅特勒公司） PHS-3B型pH计（上海精密科学仪器有限公司） MSP-100E微波萃取装置（雷鸣科技仪器公司） 2.主要试剂 乙醇、正丁醇（分析纯，北京化工厂）；甲醇（色谱纯，天津西华特种试剂 厂)；去离子水（自制）；葛根样品产地分别为安徽和湖南，葛根素、大豆武和大 豆甙元标准品（中国药品生物制品检定所）。 3.实验步骤 (1)水煮法 水煮法是用水做溶剂，加热一定时间，能提出较多成分，符合传统用药习惯 时常用的一种提取方法。此方法生产成本低，适合工业化生产。 (2)醇提法 醇提法是葛根提取工艺中最常用的提取方法。称取适量的葛根加乙醇进行回 流，冷却后待测

不同提取方法测定葛根中三种有效成分 一、实验目的及意义 1. 了解水煮法、醇提法、微波辅助萃取法、超声波法、索氏提取法和溶剂浮选法； 2. 熟悉相关仪器的使用操作。 二、研究背景简介 葛根为临床常用中药，具有解肌退热、升阳透疹、生津止泻的功效。葛根的主 要活性成分是葛根素、大豆甙、大豆甙元等多种异黄酮类物质。并含有多糖及多种 微量元素，现代药理研究表明，葛根黄酮具有改善心脑血液循环，扩张冠状动脉， 降血压，降血糖等作用；大豆甙元有明显抗心律失常作用，一直白血细胞的增殖及 黑色素瘤细胞的分化。民间常用葛根一味退热生津。近几年临床上应用含葛根的的 制剂愈风宁心片、葛根素注射液等治疗偏头痛、高血压、冠心病等疾病。目前正在 研制的还有葛根黄铜生物粘附性缓释片、葛根黄铜缓释胶囊、葛根素微乳、葛根素 滴丸、葛根素复合骨架稀释片、配方颗粒等。由于葛根属于药食同源，也被广泛的 应用于保健品和食品中。 本课题对湖南和安徽两个地区的葛根采用水煮法、超声提取法、醇提法、微波 辅助萃取法、索氏提取法、溶剂浮选法的提取方法，并针对其三种有效成分葛根 素、大豆甙、大豆甙元的 HPLC 测定结果进行了分析比较。 三、实验内容 1. 主要仪器 安捷伦液相色谱仪 1100 系列（美国安捷伦公司） AB204-N 电子天平（瑞士梅特勒公司） PHS-3B 型 pH 计（上海精密科学仪器有限公司） MSP-100E 微波萃取装置（雷鸣科技仪器公司） 2. 主要试剂 乙醇、正丁醇（分析纯，北京化工厂）；甲醇（色谱纯，天津西华特种试剂 厂）；去离子水（自制）；葛根样品产地分别为安徽和湖南，葛根素、大豆甙和大 豆甙元标准品（中国药品生物制品检定所）。 3. 实验步骤 （1） 水煮法 水煮法是用水做溶剂，加热一定时间，能提出较多成分，符合传统用药习惯， 时常用的一种提取方法。此方法生产成本低，适合工业化生产。 （2）醇提法 醇提法是葛根提取工艺中最常用的提取方法。称取适量的葛根加乙醇进行回 流，冷却后待测

(3)微波辅助萃取法 称取适量的葛根，用75%乙醇作为溶剂，在一定微波萃取条件下进行萃取，冷 却后待测。 (4)超声波法 称取适量的葛根，用75%乙醇作为溶剂，在一定超声条件下进行萃取，冷却后 待测。 (5)索氏提取法 称取适量的葛根，用75%乙醇作为溶剂进行索氏提取，冷却后待测。 (6)溶剂浮选法 实验利用大豆武元、葛根素和大豆式分子之间的疏水亲气性来进行浮选，浮选 一段时间后，可观察到上层的颜色明显变黄，静置片刻，用吸管取出上层有机相， 冷却后待测。 4。不同提取方法的比较 利用PLC对不同提取方法获得的有效成分含量进行测定，确定最佳提取 方法

（3） 微波辅助萃取法 称取适量的葛根，用 75%乙醇作为溶剂，在一定微波萃取条件下进行萃取，冷 却后待测。 （4） 超声波法 称取适量的葛根，用 75%乙醇作为溶剂，在一定超声条件下进行萃取，冷却后 待测。 （5） 索氏提取法 称取适量的葛根，用 75%乙醇作为溶剂进行索氏提取，冷却后待测。 （6） 溶剂浮选法 实验利用大豆甙元、葛根素和大豆甙分子之间的疏水亲气性来进行浮选，浮选 一段时间后，可观察到上层的颜色明显变黄，静置片刻，用吸管取出上层有机相， 冷却后待测。 4. 不同提取方法的比较 利用 HPLC 对不同提取方法获得的有效成分含量进行测定，确定最佳提取 方法

高速逆流色谱技术分离纯化白芷中有效成分 一、实验的目的及意义 1、通过讲座教学使学生了解逆流色谱技术的起源与发展：了解仪器类型，柱 多维、梯度洗脱、pH区带、离心沉降等新技术：掌握逆流色谱的基本原理、操作 方法，溶剂体系选择原则、方法。 2、通过实验掌握应用逆流色谱法分离天然产物实际样品的方法、基本操作， 高效液相色谱分析鉴定方法。 3、掌握中药有效成分逆流色谱分离方法，为学生今后在相关领域的进一步深 造和医药保健食品产业工作奠定基础。 二、研究背景介绍 1.逆流色谱技术简介 高速逆流色谱技术是一种八十年代发展起来的新型高效的分离纯化技术。它相 对于传统的柱层析、大孔吸附树脂纯化技术以及膜分离技术更具有独到的优势。高 速逆流色谱技术(High-speed Countercurrent Chromatography,简称HSCCC)是一种 无需任何固态支撑介质的液液分配色谱分离技术。它不同于传统的柱色谱分离技 术，由于不需使用固体填料，因而避免了因不可递吸附而引起的样品损失、失活 极大地控制了样品的变性问题，能使被分离样品定量回收。它具有适用范围广、高 效、快速等优点，非常适合于天然产物有效成分的分离和纯化。目前，HSCCC技 术已被广泛应用于生物、医药、环保和农业等领域中活性成分的分离制备，愈来愈 显示了其强有力的功用，逐渐发展成为倍受关注的一种分离纯化技术。 2.中药白芷有效成分及研究概况 中药白芷主要含挥发性成分和香豆素类。白芷根含呋喃香豆素，主要为比克白 芷素、比克白芷醚、氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素等。杭白芷根含异欧前胡 素(isoimperatorin)、欧前胡素(imperatorin)、佛手柑内酯(bergapten)、 珊瑚菜素(phellopterin)、氧化前胡素(oxypeucedanin)等。杭白芷尚含谷甾 醇、甾醇类、硬脂酸、白芷醛等。白芷作药用历史悠久，自汉代的《神农本草经》 书中就有记载，使用范围较广，属功效明确的一味常用中药。白芷的药理作用具 有解热、镇痛、抗炎，降压作用，白芷提取总香豆素，用以治疗白搬风获得了满意 的疗效，并制成了方便有效的中成药。目前对白芷总香豆素药效学研究较多，标准 品制备及质量检测方法的研究较少，国内肖永庆博士以对照品异欧前胡素、欧前胡 素进行了白芷质量标准的研究，日本Masaki用高效液相色谱测定了几个香豆素。 但入世以来随着外国制剂进口的增加，造成国内制药企业压力很大，高纯度香豆素 单体的制备，获得国家实物标准，建立质量标准检测方法，迫在眉睫。若在获得国

高速逆流色谱技术分离纯化白芷中有效成分 一、 实验的目的及意义 1、通过讲座教学使学生了解逆流色谱技术的起源与发展；了解仪器类型，柱 多维、梯度洗脱、pH 区带、离心沉降等新技术；掌握逆流色谱的基本原理、操作 方法，溶剂体系选择原则、方法。 2、通过实验掌握应用逆流色谱法分离天然产物实际样品的方法、基本操作， 高效液相色谱分析鉴定方法。 3、掌握中药有效成分逆流色谱分离方法，为学生今后在相关领域的进一步深 造和医药保健食品产业工作奠定基础。 二、研究背景介绍 1. 逆流色谱技术简介 高速逆流色谱技术是一种八十年代发展起来的新型高效的分离纯化技术。它相 对于传统的柱层析、大孔吸附树脂纯化技术以及膜分离技术更具有独到的优势。高 速逆流色谱技术（High-speed Countercurrent Chromatography,简称 HSCCC）是一种 无需任何固态支撑介质的液液分配色谱分离技术。它不同于传统的柱色谱分离技 术，由于不需使用固体填料，因而避免了因不可逆吸附而引起的样品损失、失活, 极大地控制了样品的变性问题，能使被分离样品定量回收。它具有适用范围广、高 效、快速等优点，非常适合于天然产物有效成分的分离和纯化。目前，HSCCC 技 术已被广泛应用于生物、医药、环保和农业等领域中活性成分的分离制备,愈来愈 显示了其强有力的功用，逐渐发展成为倍受关注的一种分离纯化技术。 2. 中药白芷有效成分及研究概况 中药白芷主要含挥发性成分和香豆素类。白芷根含呋喃香豆素，主要为比克白 芷素、比克白芷醚、氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素等。杭白芷根含异欧前胡 素（isoimperatorin）、欧前胡素（imperatorin）、佛手柑内酯（bergapten）、 珊瑚菜素（phellopterin）、氧化前胡素（oxypeucedanin）等。杭白芷尚含谷甾 醇、甾醇类、硬脂酸、白芷醛等。白芷作药用历史悠久，自汉代的《神农本草经》 一书中就有记载，使用范围较广，属功效明确的一味常用中药。白芷的药理作用具 有解热、镇痛、抗炎，降压作用，白芷提取总香豆素，用以治疗白癜风获得了满意 的疗效，并制成了方便有效的中成药。目前对白芷总香豆素药效学研究较多，标准 品制备及质量检测方法的研究较少，国内肖永庆博士以对照品异欧前胡素、欧前胡 素进行了白芷质量标准的研究，日本 Masaki 用高效液相色谱测定了几个香豆素。 但入世以来随着外国制剂进口的增加，造成国内制药企业压力很大，高纯度香豆素 单体的制备，获得国家实物标准，建立质量标准检测方法，迫在眉睫。若在获得国

家标准物质及建立标准质量检测方法基础上，提高药物质量，将利于药品出口及提 高抵御外国进口制剂对国内市场的冲击。 三、实验内容 1、实验仪器： 高速逆流色谱仪器、HPLC仪、旋转蒸发仪及其它必需的小型仪器。 2、逆流体系的选释 3、高效液相色谱分析鉴定

家标准物质及建立标准质量检测方法基础上，提高药物质量，将利于药品出口及提 高抵御外国进口制剂对国内市场的冲击。 三、实验内容 1、实验仪器： 高速逆流色谱仪器、HPLC 仪、旋转蒸发仪及其它必需的小型仪器。 2、逆流体系的选择 3、高效液相色谱分析鉴定