重庆医科大学：《免疫学实验》课程教学课件（PPT讲稿）实验三 免疫标记技术 Immunolabeling technique

免疫标记技术Immunolabelingtechnique

免疫标记技术 Immunolabeling technique

实验内容（小组做）1.ELISA检测HBsAg2.尿液HCG检测（胶体金法）（小组做）3.免疫标记技术（录像）

1. ELISA检测HBsAg (小组做) 实验内容 3. 免疫标记技术 (录像) 2. 尿液HCG检测(胶体金法)(小组做)

实验目的1.掌握酶联免疫吸附实验的基本原理2.了解利用双抗体夹心法测定HBsAg的方法3.了解胶体金法检测HCG的原理、方法

实验目的 1.掌握酶联免疫吸附实验的基本原理； 2.了解利用双抗体夹心法测定HBsAg的方法； 3. 了解胶体金法检测HCG的原理、方法

标记技术免疫标记技术=免疫技术+酶荧光素抗原抗体反应示踪物标记同位素特异性灵敏性高特异性免疫标记技术主要特点高灵敏性

免疫标记技术=免疫技术+ 标记技术 酶 荧光素 同位素 抗原抗体反应 示踪物标记 特异性 灵敏性 免疫标记技术主要特点 高特异性 高灵敏性

免疫标记技术酶免疫组化技术酶标技术酶联免疫吸附技术免疫荧光技术放射物标记技术其他标记技术

免疫标记技术 放射物标记技术 酶标技术 免疫荧光技术 其他标记技术 酶联免疫吸附技术 酶免疫组化技术

一、酶免疫技术基本原理利用酶催化底物反应的生物放大作用，提高特异性抗原一抗体免疫学反应的检测敏感性的一种标记免疫技术。AgAbEAg + AbE+底物呈色反应

基本原理 利用酶催化底物反应的生物放大作用,提高特 异性抗原-抗体免疫学反应的检测敏感性的一 种标记免疫技术。 Ag + AbE AgAbE + 底物 呈色反应 一、酶免疫技术

AntigenAAntigenBEIA(酶免疫测定法)Addanti-Aantibodycovalentlylinkedtoenzyme固相Washawayunboundantibody聚苯乙烯AddenzymethatAg或Ab吸附到固相makescolouredproductfromadded colourlesssubstrate上的过程，称为包被Measureabsorbanceof lightbycolouredproduct

EIA 固相 聚苯乙烯 Ag或Ab吸附到固相 上的过程,称为包被 (酶免疫测定法)

基本特点:①包被或标记后保留酶和抗原（抗体）的活性：②酶促反应专一性，保证特异性：1③底物反应放大作用，提高敏感性：④酶标试剂保存稳定；5操作简便，安全易行

基本特点： ①包被或标记后保留酶和抗原(抗体)的活性； ②酶促反应专一性，保证特异性； ③底物反应放大作用，提高敏感性； ④酶标试剂保存稳定； ⑤操作简便，安全易行

常用酶及其底物1.辣根过氧化物酶(HRP)常用底物：邻苯二胺(OPD):反应显橙黄色，应避光，致癌性。四甲基联苯胺(TMB)：反应后呈蓝色，无需避光，无致癌性但水溶性差。2.碱性磷酸酶（AP)常用底物：对硝基苯磷酸酯(p-NPP)：产物为黄色。AP灵敏性高于HRP，但不易获得纯品，且稳定性低于HRP、价高，故应用不如HRP普及

常用酶及其底物 常用底物： 邻苯二胺(OPD)：反应显橙黄色，应避光，致癌性。 四甲基联苯胺(TMB)：反应后呈蓝色，无需避光，无致癌性, 但水溶性差。 常用底物： 对硝基苯磷酸酯(p-NPP)：产物为黄色。 AP灵敏性高于HRP，但不易获得纯品，且稳定性低于HRP、 价高，故应用不如HRP普及。 1.辣根过氧化物酶(HRP) 2.碱性磷酸酶(AP)

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