中国人民解放军陆军军医大学（第三军医大学）：免疫缺陷性疾病的免疫学检测（PPT实验课件讲稿）

第十单元 免疫缺陷性疾病的免疫学检测 人卫《版法

第十单元 免疫缺陷性疾病的免疫学检测

实验一HIV抗体初筛实验 人卫《版法

实验一 HIV抗体初筛实验

获得性免疫缺陷综合征 是由人类兔疫缺陷病毒(HⅣ)感染所引起的 以CD4T细胞减少为主要特征,同时伴反复机会 感染、恶性肿瘤及中枢神经系统退行性病变的一组 综合征。 人卫《版法

获得性免疫缺陷综合征 是由人类免疫缺陷病毒（HIV）感染所引起的 以CD4+ T细胞减少为主要特征，同时伴反复机会 感染、恶性肿瘤及中枢神经系统退行性病变的一组 综合征

检测方法 HⅣ感染的免疫学检验方法主要针对病毒抗原和抗病毒抗 体的检测以及免疫细胞数量和功能的分析 HIⅣ抗体初筛实验主要包括酶联免疫吸附试验(ELsA) 化学发光或免疫荧光试验、快速检测试验〔明胶颗粒凝集 试验、免疫渗滤试验和免疫层析试验)等。 ELISA是最常用的HⅣV抗体初筛实验方法。本实验采用双 抗原夹心ELSA法检测人血清中HⅣ抗体。 人卫《版法

HIV感染的免疫学检验方法主要针对病毒抗原和抗病毒抗 体的检测以及免疫细胞数量和功能的分析。 HIV抗体初筛实验主要包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、 化学发光或免疫荧光试验、快速检测试验（明胶颗粒凝集 试验、免疫渗滤试验和免疫层析试验）等。 ELISA是最常用的HIV抗体初筛实验方法。本实验采用双 抗原夹心ELISA法检测人血清中HIV抗体。 检测方法

实验条件 在符合Ⅱ级生物安全实验室(BSL-2)要求 的艾滋病检测实验室中进行。 人卫《版法

在符合Ⅱ级生物安全实验室（BSL-2）要求 的艾滋病检测实验室中进行。 实验条件

实验原理 将HⅣ抗原包被于固相载体,加入待检样品和酶标记 的HIⅣ抗原,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,洗涤, 加底物显色。通过酶标仪检测吸光度A450nm值,根据 A450nm值判断IV抗体的存在与否。 人卫《版法

将HIV抗原包被于固相载体，加入待检样品和酶标记 的HIV抗原，形成抗原－抗体－酶标抗原复合物，洗涤， 加底物显色。通过酶标仪检测吸光度A450nm 值，根据 A450nm 值判断HIV抗体的存在与否。 实验原理

试剂与器材 1.HV抗原酶标板 2洗涤液PBS- Tween20。 3辣根过氧化物酶标记的HⅠV抗原 4辣根过氧化物酶底物溶液。 5底物稀释液PBS-1%BSA。 6终止液2moMH2SO4溶液。 7对照血清临床标本筛选获得的阳性血清和阴性血清。 8酶标仪、洗板机。 人卫《版法

1.HIV抗原酶标板。 2.洗涤液 PBS-Tween20。 3.辣根过氧化物酶标记的HIV抗原。 4.辣根过氧化物酶底物溶液。 5.底物稀释液 PBS-1%BSA。 6.终止液 2mol/l H2SO4溶液。 7.对照血清 临床标本筛选获得的阳性血清和阴性血清。 8.酶标仪、洗板机。 试剂与器材

操作步骤 编号:将样品对应微孔按序编号,每板设阴性对照2孔、 阳性对照3孔,空白对照2孔 加祥:分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照 100μl,用封板膜封板后置37℃温育60min。 洗瀑:用洗板机清洗,在干净滤纸上拍千。 加:每孔加酶结合物100μ(空白对照孔除外),充分 混匀,置37℃温育30min。 洗瀑:用洗板机清洗,在干净滤纸上拍干。 显色:每孔加入底物缓冲液50μ,TMB50μ,振荡混 匀,37℃避光显色10min。 测定:每孔加终止液50μ,振荡混匀。在450mm浪长 下,酶标仪测定各孔A450nm值 人卫《版法

操作步骤 编号：将样品对应微孔按序编号，每板设阴性对照2孔、 阳性对照3孔，空白对照2孔 加样：分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照 100μl，用封板膜封板后置37℃温育60min。 洗涤：用洗板机清洗，在干净滤纸上拍干。 加酶：每孔加酶结合物100μl（空白对照孔除外），充分 混匀，置37℃温育30min。 洗涤：用洗板机清洗，在干净滤纸上拍干。 显色：每孔加入底物缓冲液50μl，TMB 50μl，振荡混 匀，37℃避光显色10min。 测定：每孔加终止液50μl，振荡混匀。在450nm波长 下，酶标仪测定各孔A450nm值

结果判断 计算临界值:临界值阳性对照值×10% 正常情况下,阳性对照孔的A450m值0.80,样品A450m 值临界值者为HI抗体阳性 正常情况下,阴性对照孔的A450m值<0.08,样品A4som 值<临界值者为HIⅣ抗体阴性 人卫《版法

结果判断 计算临界值：临界值=阳性对照值×10%。 正常情况下，阳性对照孔的A450nm值≥0.80，样品A450nm 值≥临界值者为HIV抗体阳性。 正常情况下，阴性对照孔的A450nm值≤0.08，样品A450nm 值＜临界值者为HIV抗体阴性

注意事项 实验中设立阳性与阴性对照。 底物显色时间不宜过长 注意生物安全。 对初筛呈阳性反应的样品,应进行复检试验。如复检均 呈阴性,则报告HIV抗体阴性(-);如均呈阳性反应, 或一阴一阳,应送HIⅣ确证实验室进行确证试验 人卫《版法

注意事项 实验中设立阳性与阴性对照。 底物显色时间不宜过长。 注意生物安全。 对初筛呈阳性反应的样品，应进行复检试验。如复检均 呈阴性，则报告HIV抗体阴性（-）；如均呈阳性反应， 或一阴一阳，应送HIV确证实验室进行确证试验