生物学实验（PPT课件讲稿）PCR扩增目的基因、质粒DNA的碱法小量制备、密度梯度离心法提取叶绿体、考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度

分子生物学实验 PCR扩增目的基因

分子生物学实验 PCR扩增目的基因

实验目的 (1)PCR扩增目的基因红细胞生成因子nap基因 部分片段; (2)掌握PCR扩增原理 3)学习并熟悉PCR操作

实验目的 (1)PCR扩增目的基因红细胞生成因子nap基因 部分片段； (2)掌握PCR扩增原理； (3)学习并熟悉PCR操作

实验原理 (1)PCR反应原理 cells solate DNA DNA to be cloned sR合AB鼻合 CR AMPLIFICATION anomIc clones Figure 840 part 1 of 2. Molecular Biology of the cell, 4th Edition

实验原理 (1)PCR反应原理

+DNA polymerase HEAT TO DNA HYBRIDIZATION +dATP SEPARATE SYNTHESIS double-stranded OF PRIMERS +dGTP STRANDS FROM DNA +dCTP PRIMERS dTTP STEP 1 STEP 2 STEP 3 FIRST CYCLE Figure 8-39 part 1 of 3. Molecular Biology of the Cell, 4th Edition

(B) separate dNA strands and annea DNA separate dNA DNA primer synthesis strands and add prImer synthesis DNA oligonucleotide primers region of double-stranded chromosoma DNA to be amplified FIRST CYCLE SECOND CYCLE (producing two double-stranded (producing four double-stranded DNA molecules DNA molecules Figure 8-39 part 2 of 3. Molecular Biology of the Cell, 4th Edition

separate DNA strands and anneal DNA prImer synthesis etc THIRD CYCLE (producing eight double-stranded DNA molecules) Figure 8-39 part 3 of 3. Molecular Biology of the Cell, 4th Edition

循环1 循环2 温度 循环3 (℃) 94℃变性 94 (1min) 72℃延伸 60 ℃退火(15min) (lmin) 时间

温度 （℃） 时间 （min） 94 72 60 94℃变性 （1min） 60 ℃退火 （1min） 72 ℃延伸 （1.5min） 循环1 循环2 循环3

Caution! Hot Base eppendorf Mastercycler 5330

Reaction pcr dans le thermocycler nalyse d produit PCR sur gel d' agarose Melange reactionnel Taille attendee du fragment Pour voir Animation, cliquez-moi La Pcr

(2)PCR反应体系 总体系一般采用25或50u 模板核酸 ( template如:人基因组DNA 0.1ug) 扩增引物 primer对,各025umo/L) TaqDNA聚合酶(25U) dNTP 四种:各200umo/L 标准的缓冲液10 X buffer(KCl、 Tris-HCl MgC2、BSA或明胶) 无菌双蒸水或三蒸水 石蜡油或矿物油30~50u(封闭、防止高温时 液体的 挥发)

模板核酸 （ template如：人基因组DNA 0.1ug) 扩增引物 （primer一对,各0.25umol/L） TaqDNA聚合酶（2.5U） dNTP （四种：各200umol/L) 标准的缓冲液 10X buffer（KCl、Tris-HCl、 MgCl2、BSA或明胶） 无菌双蒸水或三蒸水 石蜡油或矿物油 30~50ul（封闭、防止高温时 液体的 挥发） (2)PCR反应体系 总体系一般采用25或50ul