襄樊职业技术学院：《植物组织培养》课程教学资源（PPT课件）第十六章 原生质体培养与融合

第16章 原生质体培养与融合 原生质体培养的意义 原生质体操作方法 >原生质体融合的意义 融合方法 体细胞杂种鉴定方法

第16章 原生质体培养与融合 ➢原生质体培养的意义 ➢原生质体操作方法 ➢原生质体融合的意义 ➢融合方法 ➢体细胞杂种鉴定方法

原生质体( Protoplast) 1880, Hanstein:质壁分离时,能够与细胞壁分开 的那部分细胞物质。 含义:去掉细胞壁的由质膜包裹、具有生活力的裸 露细胞

原生质体（Protoplast） • 1880, Hanstein：质壁分离时，能够与细胞壁分开 的那部分细胞物质。 • 含义：去掉细胞壁的由质膜包裹、具有生活力的裸 露细胞

Leucoplast Golgi Cor Pal vacuole Nucleus Pore. Chromosomes Mitcchoneton uclear Envelo S:arch Granule Chloroplast Plasma Mnmb Smooth Endoplasmic Reticulum Fough Endoplasmic Reticulum Paroxis 细胞 Cell Wall

细 胞

植物细胞模式图 高尔基体 液泡 微丝 细胞核 叶绿体 内质网 线粒体 微管 质膜 细胞壁 细胞壁由三种主要成分构成 纤维素25-50%、半纤维素53%和果胶5%

微 丝 叶绿体 线粒体 质 膜 液 泡 细胞核 内质网 微 管 细胞壁 高尔基体 植物细胞模式图 细胞壁由三种主要成分构成 纤维素25-50%、半纤维素53%和果胶5%

原生质体培养发展简史及其意义 1、发展简史 令1892年: Klercker机械法利刃)分离原生质体; 1960年:1960年英国诺丁汉大学 Cocking教授 率先利用真菌纤维素酶,制备了大量具有高度 活性可再生的番茄幼根细胞原生质体; ◆1968年:纤维素酶和果胶酶投入市场; 1968年: Takebe首先用商品酶进行原生质体分 离:烟草叶肉原生质体,两步法和一步法

一、原生质体培养发展简史及其意义 1、发展简史 ❖1892年：Klercker机械法(利刃)分离原生质体； ❖1960年：1960年英国诺丁汉大学Cocking 教授 率先利用真菌纤维素酶，制备了大量具有高度 活性可再生的番茄幼根细胞原生质体； ❖1968年：纤维素酶和果胶酶投入市场； ❖1968年：Takebe首先用商品酶进行原生质体分 离：烟草叶肉原生质体，两步法和一步法

1971年: Takebe培养烟草叶肉原生质体,首 次获得再生植株。 1993年有49个科、146个属的320多种植物 经原生质体培养得到了再生植株。其趋势主 要是农作物和经济植物,从一年生扩展到多 年生,从草本到木本、从高等植物到低等植 物,食用菌、藻类、大豆、棉花、油菜、水 稻、玉米、柑桔、猕猴桃、桃、苹果、马铃 薯、胡夢卜、黄瓜、杨树、云榜等; 1986年: Spangenberg单个原生质体培养成功;

❖1971年：Takebe培养烟草叶肉原生质体，首 次获得再生植株。 1993年有49个科、146个属的320多种植物， 经原生质体培养得到了再生植株。其趋势主 要是农作物和经济植物，从一年生扩展到多 年生，从草本到木本、从高等植物到低等植 物，食用菌、藻类、大豆、棉花、油菜、水 稻、玉米、柑桔、猕猴桃、桃、苹果、马铃 薯、胡萝卜、黄瓜、杨树、云杉等； ❖1986年：Spangenberg单个原生质体培养成功；

2、原生质体培养的意义 (1)为细胞融合奠定基础。 有性杂交不能进行细胞质交流 酚

2、原生质体培养的意义 （1）为细胞融合奠定基础。 有性杂交不能进行细胞质交流

(2)是遗传工程的理想受体。 能够直接摄取外源DNA,细胞器甚至微生物 Isolated protoplast are capable of ingesting l foreign material into the cytoplasm. This material includes the introduction of nuclei chloroplasts, mitochondria, DNA, plasmids, bacteria and viruses 原生质体也具有全能性 原生质体是分子水平和细胞水平上 研究遗传信息动态的结合点

（2）是遗传工程的理想受体。 能够直接摄取外源DNA，细胞器甚至微生物。 Isolated protoplast are capable of ingesting "foreign" material into the cytoplasm. This material includes the introduction of nuclei, chloroplasts, mitochondria, DNA, plasmids, bacteria and viruses. 原生质体也具有全能性 原生质体是分子水平和细胞水平上 研究遗传信息动态的结合点

(3)理论研究 细胞壁再生、细胞膜离子转运、病毒侵染 因为细胞壁不仅具有保护功能,还参 与细胞的生长和分化等生命活动。 但是必须指出:原生质体必须再生 出细胞壁才能继续发育

（3）理论研究 细胞壁再生、细胞膜离子转运、病毒侵染。 因为细胞壁不仅具有保护功能，还参 与细胞的生长和分化等生命活动。 但是必须指出：原生质体必须再生 出细胞壁才能继续发育

原生质体分离及培养 (一)分离方法 机械法:利刃机械切割 酶解法:果胶酶和纤维素酶处理

二、原生质体分离及培养 （一） 分离方法 机械法：利刃机械切割 酶解法：果胶酶和纤维素酶处理