湖南农业大学：《生化与分子生物学》课程教学资源（PPT课件）第6章 核酸的酶促降解和核苷酸代谢

第六章 核酸的酶促降解和核苷酸代谢 本章讨论核酸酶的类别和特点，对核苷酸 的生物合成和分解代谢作一般介绍。 第一节 核酸的酶促降解 第三节 核苷酸的合成代谢 第二节 核苷酸的分解代谢

第六章 核酸的酶促降解和核苷酸代谢 本章讨论核酸酶的类别和特点，对核苷酸 的生物合成和分解代谢作一般介绍。 第一节 核酸的酶促降解 第三节 核苷酸的合成代谢 第二节 核苷酸的分解代谢

第一节 核酸的酶促降解 一、核酸酶 二、限制性内切酶 核酸酶 核苷酸酶 核苷磷酸化酶 核酸 核苷酸 核苷 碱基+戊糖-1-P 磷酸

第一节 核酸的酶促降解 一、核酸酶 二、限制性内切酶 核酸酶 核苷酸酶 核苷磷酸化酶 核酸 核苷酸 核苷 碱基+戊糖-1-P 磷酸

核 酸 酶 1、核酸酶的分类 （1）根据对底物的 专一性分为 （2）根据切割位点分为 核糖核酸酶(RNase) 脱氧核糖核酸酶(DNase) 非特异性核酸酶 核酸内切酶 核酸外切酶 2、核酸酶的作用特点

核 酸 酶 1、核酸酶的分类 （1）根据对底物的 专一性分为 （2）根据切割位点分为 核糖核酸酶(RNase) 脱氧核糖核酸酶(DNase) 非特异性核酸酶 核酸内切酶 核酸外切酶 2、核酸酶的作用特点

外切核酸酶对核酸的水解位点 5´ p p p p OH B p p p p 3´ B B B B B B B 牛脾磷酸二酯酶 （ 5´端外切5得3） 蛇毒磷酸二酯酶 （ 3´端外切3得5）

外切核酸酶对核酸的水解位点 5´ p p p p OH B p p p p 3´ B B B B B B B 牛脾磷酸二酯酶 （ 5´端外切5得3） 蛇毒磷酸二酯酶 （ 3´端外切3得5）

内切核酸酶对RNA的水解位点示意图 5´ p p p p OH Py Pu Py Py 1´ p p p G A C U p p p G A 3´ RNAase I RNAase I RNAase T1 RNAase T1 Pu ：嘌呤 Py：嘧啶

内切核酸酶对RNA的水解位点示意图 5´ p p p p OH Py Pu Py Py 1´ p p p G A C U p p p G A 3´ RNAase I RNAase I RNAase T1 RNAase T1 Pu ：嘌呤 Py：嘧啶

限制性内切酶 • 类型 • 命名 • 意义 原核生物中存在着一类能识别外源DNA双螺旋中4-8个碱基 对所组成的特异的具有二重旋转对称性的回文序列，并在此序 列的某位点水解DNA双螺旋链，产生粘性末端或平末端，这类 酶称为限制性内切酶（ristriction endonuclease）

限制性内切酶 • 类型 • 命名 • 意义 原核生物中存在着一类能识别外源DNA双螺旋中4-8个碱基 对所组成的特异的具有二重旋转对称性的回文序列，并在此序 列的某位点水解DNA双螺旋链，产生粘性末端或平末端，这类 酶称为限制性内切酶（ristriction endonuclease）

常用的DNA限制性内切酶的专一性 酶 辨认的序列和切口 说明 ‥ ‥A G C T ‥‥ ‥ ‥T C G A ‥ ‥ ‥ ‥G G A T C C ‥‥ ‥ ‥C C T A G G ‥‥ ‥ ‥A G A T C T ‥‥ ‥ ‥T C T A G A ‥‥ ‥ ‥G A A T T C ‥‥ ‥ ‥C T T A A G ‥‥ ‥ ‥A A G C T T‥‥ ‥ ‥T T C G A A ‥‥ ‥ ‥G T C G A C ‥‥ ‥ ‥C A G C T G ‥‥ ‥ ‥C C C G G G ‥‥ ‥ ‥G G G C C C ‥‥ Bam H I Alu I Bgl I Eco R I Hind Ⅲ Sal I Sma I 四核苷酸，平端切口 六核苷酸，平端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口

常用的DNA限制性内切酶的专一性 酶 辨认的序列和切口 说明 ‥ ‥A G C T ‥‥ ‥ ‥T C G A ‥ ‥ ‥ ‥G G A T C C ‥‥ ‥ ‥C C T A G G ‥‥ ‥ ‥A G A T C T ‥‥ ‥ ‥T C T A G A ‥‥ ‥ ‥G A A T T C ‥‥ ‥ ‥C T T A A G ‥‥ ‥ ‥A A G C T T‥‥ ‥ ‥T T C G A A ‥‥ ‥ ‥G T C G A C ‥‥ ‥ ‥C A G C T G ‥‥ ‥ ‥C C C G G G ‥‥ ‥ ‥G G G C C C ‥‥ Bam H I Alu I Bgl I Eco R I Hind Ⅲ Sal I Sma I 四核苷酸，平端切口 六核苷酸，平端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口

BamHI Pvu I Kpn I GGATCC CAGCTG GGTACC CCTAGG GTCGAC CCATGG G3' 5GATCC CAG3 5CTG GTAC3' 5'C CCTAG5' 3G GTC5 3GAC C 3CATG 5粘性末端 平齐末端 3粘性末端 图11-4 三种不同类型限制性内切酶切割示意图

DNA 1 DNA2 GAATTO GAATTC CT竹AAG CTTAAG EcoRI EcoRI G AATTC CTTAA CTTAA DNA片段退火并由 DNA连接酶连接 GAATTC GAAT王Q CA闪G CTT AA 重组DNA分子 用限制酶创建重组DNA

限制性内切酶类型 I型：分子量大于105，多亚基，需S-线苷蛋氨酸、ATP 和Mg2+ ，识别位点与切割位点相差甚远，产物为异质，是限 制与修饰相排斥的多功能酶. Ⅱ型：分子量小于105，需Mg2+ ，切割位点位于识别 位点上，产物为专一性片段，不具修饰酶功能。现在分子生 物学研究所用的限制性内切酶均为此类。 ⅡI型：识别位点为5-7bp的非对称序列，切割位点在 顺序之外离识别序列5-10bp，切割双链，个别也切割单链。 是限制与修饰相多功能酶

限制性内切酶类型 I型：分子量大于105，多亚基，需S-线苷蛋氨酸、ATP 和Mg2+ ，识别位点与切割位点相差甚远，产物为异质，是限 制与修饰相排斥的多功能酶. Ⅱ型：分子量小于105，需Mg2+ ，切割位点位于识别 位点上，产物为专一性片段，不具修饰酶功能。现在分子生 物学研究所用的限制性内切酶均为此类。 ⅡI型：识别位点为5-7bp的非对称序列，切割位点在 顺序之外离识别序列5-10bp，切割双链，个别也切割单链。 是限制与修饰相多功能酶