绍兴文理学院生命科学学院：《细胞生物学 Cell Biology》课程教学资源（实验PPT讲稿）实验一 光学显微镜使用及显微摄影技术

实验一、光学显微镜使用 及显微摄影技术 Dr.Tian 2002

实验一、光学显微镜使用 及显微摄影技术

一、实验目的 ·1.了解显微镜各部分的名称、结构和功能 学习普通光学显微镜、暗视野显微镜、相 差显微镜、荧光显微镜、微分干涉差显微 镜、倒置显微镜、显微操作仪等的构造和 使用方法。 2.掌握显微摄影的基本方法，学会显微镜 的视差校正，曝光控制 Dr.Tian 2002

一、实验目的 • 1．了解显微镜各部分的名称、结构和功能， 学习普通光学显微镜、暗视野显微镜、相 差显微镜、荧光显微镜、微分干涉差显微 镜、倒置显微镜、显微操作仪等的构造和 使用方法。 • 2 ．掌握显微摄影的基本方法，学会显微镜 的视差校正，曝光控制

胶片平面 1、普通光学显微镜 照相机接口 取景器 光学传感器阵列 PLI投影镜头 眼点位置 物镜 载物台运动控制旋钮 同轴粗微调旋钮 聚光器 视场光阑调节环 8 漫射镜 灯室聚光镜 集光镜 卤素灯

1、普通光学显微镜

eye eyepiece (ocular) Light Pathway of Microscope objective specimen condenser light 00m☐ source /111IX

Light Pathway of Microscope

分辨力等于光点爱里圆盘的半径 R=0.61WN.A. 其中λ为入射光线波长；N.A.为镜口率=n sina/2,n= 介质折射率；α=镜口角（样品对物镜镜口的张角）。 Airy disc Object Image Diaphragm Lens Ksuejul http://www.cella.cn Distance

分辨力等于光点爱里圆盘的半径 R=0.61λ/N．A． 其中λ为入射光线波长；N．A．为镜口率 ＝ｎsinα/2，n= 介质折射率；α=镜口角（样品对物镜镜口的张角）

两个最近可分辨光点的爱里圆盘 http://www.cella.cn Lens Distance •思考：如何提高显微镜的分辨能力？

两个最近可分辨光点的爱里圆盘 •思考：如何提高显微镜的分辨能力？

2、荧光显微镜Fluorescence microscope

2、荧光显微镜 Fluorescence microscope

eyepiece 3 3 second barrier filter:cuts out unwanted fluorescent signals passing the specific green fluorecein emission between 520 and 560nm LIGHT SOURCE 2 beam-splitting mirror:reflects light below 510nm but transmits light above 510nm 1 first barrier filter:lets through only blue light with a wavelenght objective lens between 450 and 490nm object

3、暗视野显微镜dark field microscope Objective lens Stage Condenser Light Dark-field stop

3、暗视野显微镜 dark field microscope

4、相差显微镜 Phase Contrast Light Pathways Objective Phase Ring- Direct -Light Diffracted Light Neutral Density Ring Transparent Specimen Figure 1 Condenser Light "Ring" Annular- Ring Light From Source

4、相差显微镜