绍兴文理学院生命科学学院：《细胞生物学 Cell Biology》课程教学资源（实验PPT讲稿）实验五 叶绿体的分离与荧光观察

实验五 叶绿体的分离与荧光观察 Dr.Tian 2002

实验五 叶绿体的分离与荧光观察

一.实验目的 01. 通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞 器分离的一般原理与方法；了解差速离心 Differential centrifugation特点与用途 ·2.了解菠菜叶绿体的形态、分布与数量。 Dr.Tian 2002

一 . 实验目的 • 1 ．通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞 器分离的一般原理与方法；了解差速离心 Differential centrifugation特点与用途 • 2 ．了解菠菜叶绿体的形态、分布与数量

二实验原理 采用差速离心分离细胞器： 一沉降顺序：核—线粒体一溶酶体与过氧化物酶 体一内质网与高基体一核蛋白体： ·叶绿体具有荧光现象， 可利用荧光显微镜观察。 菠菜叶富含叶绿体，可采用徒手切片观察其形态 和分布； Dr.Tian 2002

二 实验原理 • 采用差速离心分离细胞器； – 沉降顺序：核——线粒体——溶酶体与过氧化物酶 体——内质网与高基体——核蛋白体； • 叶绿体具有荧光现象，可利用荧光显微镜观察。 • 菠菜叶富含叶绿体，可采用徒手切片观察 其形态 和分布；

Differential centrifugation High speed Low speed

Low speed High speed Differential centrifugation

三、实验用品 。1.器材 一离心机、 研钵或组织捣碎机、显微镜、天平、 离心管、纱布、烧杯、量筒、滴管、载玻片、 盖玻片 。2.材料 一新鲜菠菜叶 。3.试剂 -0.35mo/L氯化钠溶液 Dr.Tian 2002

三、实验用品 • 1．器材 – 离心机、研钵或组织捣碎机、显微镜、天平、 离心管、纱布、烧杯、量筒、滴管、载玻片、 盖玻片 • 2．材料 – 新鲜菠菜叶 • 3．试剂 – 0.35mol/L氯化钠溶液

四、实验方法 ·(一)叶绿体的分离与观察 1.取新嫩菠菜叶，洗净檫干、去梗，称30g,分批放入研钵。 2.加入0.35molL氯化钠溶液，共150ml,研磨， 制成匀浆： 3.将匀浆用6层纱布过滤于烧杯中： 4.取滤液4ml在1000r/min离心2min,取上清： 5.上清液3000r/min离心5min.去上清，沉淀即为叶绿体： 6.加0.35molL氯化钠溶液悬浮沉淀； 7.取叶绿体悬液1滴于载玻片上，加盖片： 8.普通光镜下观察；荧光显微镜下演示 (二)菠菜叶徒手切片观察 新嫩菠菜叶斜切面1片，0.35moL氯化钠溶液1滴；加盖片轻压：光镜下观 察叶绿体在表皮细胞和保卫细胞中的分布；荧光显微镜下演示。 Dr.Tian 2002

四、实验方法 • （一）叶绿体的分离与观察 1. 取新嫩菠菜叶，洗净檫干、去梗，称30g，分批放入研钵。 2. 加入0.35mol/L氯化钠溶液， 共150ml，研磨，制成匀浆； 3. 将匀浆用６层纱布过滤于烧杯中； 4. 取滤液４ml在1000r/min离心２min，取上清； 5. 上清液3000r/min离心５min．去上清，沉淀即为叶绿体； 6. 加0.35mol/L氯化钠溶液悬浮沉淀； 7. 取叶绿体悬液１滴于载玻片上，加盖片： 8. 普通光镜下观察；荧光显微镜下演示 • （二）菠菜叶徒手切片观察 • 新嫩菠菜叶斜切面１片，0.35mol/L氯化钠溶液１滴；加盖片轻压：光镜下观 察叶绿体在表皮细胞和保卫细胞中的分布；荧光显微镜下演示