绍兴文理学院生命科学学院：《细胞生物学 Cell Biology》课程教学资源（实验PPT讲稿）实验八 石蜡切片法

实验八石蜡切片法 Dr.Tian 2002

实验八 石蜡切片法

一、实验目的 ·学习石蜡切片法 了解组织染色原理 Dr.Tian 2002

一 、实验目的 • 学习石蜡切片法 • 了解组织染色原理

二、实验原理 ·用石蜡渗透固化组织； ,用碱性染料如苏木精、碱性品红等，使细 胞核着色； 用酸性染料如伊红、酸性品红等，使细胞 中的嗜酸性成分着色，如蛋白质。 Dr.Tian 2002

二、实验原理 • 用石蜡渗透固化组织； • 用碱性染料如苏木精、碱性品红等，使细 胞核着色； • 用酸性染料如伊红、酸性品红等，使细胞 中的嗜酸性成分着色，如蛋白质

三、实验用品 ·1、器材： 切片机、水浴锅、染色缸、玻片、显微镜、试剂瓶、剪刀、 镊子、烘箱、离心管或青霉素瓶子。 ·2、试剂 苏木色精、伊红、二甲苯、中性树胶、酒精、石蜡、氨水、 盐酸、蛋清、甘油。 ·3、材料 各类你感兴趣的固定标本。 Dr.Tian 2002

三 、实验用品 • 1、器材： • 切片机、水浴锅、染色缸、玻片、显微镜、试剂瓶、剪刀、 镊子、烘箱、离心管或青霉素瓶子。 • 2、试剂 • 苏木色精、伊红、二甲苯、中性树胶、酒精、石蜡、氨水、 盐酸、蛋清、甘油。 • 3、材料 • 各类你感兴趣的固定标本

四、实验步骤 ·1、取材 。2、 固定 3、 漂洗 。4、 脱水 5、透明 6、 透蜡 7、包埋 8、修块 ·9、切片 ·10、染色 Dr.Tian 2002

四、实验步骤 • 1、取材 • 2、固定 • 3、漂洗 • 4、脱水 • 5、透明 • 6、透蜡 • 7、包埋 • 8、修块 • 9、切片 • 10、染色

取材到切片 ·取材一 固定(Cannoy's),材料厚度 2mm。 100%酒精一100%酒精一二甲苯：酒精 (1:1)一二甲苯一二甲苯一二甲苯： 石蜡(65℃1：1)—石蜡(65℃)—石 蜡(65℃)，以上处理各10-30min,视材 料大小而定，最后一步石蜡20min。 包埋一修块一切片一贴片 Dr.Tian 2002

取材到切片 • 取材——固定（Cannoy’s），材料厚度 2mm。 • 100%酒精——100%酒精——二甲苯:酒精 （1:1）——二甲苯——二甲苯——二甲苯: 石蜡（65℃ 1:1）——石蜡（65℃）——石 蜡（65℃），以上处理各10-30min，视材 料大小而定，最后一步石蜡20min 。 • 包埋——修块——切片——贴片

脱蜡与复水 ·二甲苯一二甲苯一二甲苯/无水乙醇 (1/1)—无水乙醇一无水乙醇—95% 乙醇 80%乙醇—70%乙醇—50% 乙醇一蒸馏水。 以上处理各2-3min。 Dr.Tian 2002

脱蜡与复水 • 二甲苯——二甲苯——二甲苯/无水乙醇 (1/1)——无水乙醇 ——无水乙醇——95% 乙醇——80%乙醇——70%乙醇——50% 乙醇——蒸馏水。 • 以上处理各2-3min

染色与观察 1%苏木色精(5min)一水洗—0.5%盐 酸分色（数秒)一水洗一0.4%氨水蓝 化一水洗(5min)一70%酒精 80%酒精一1%伊红(95%酒精溶解)一 一95%酒精 95%酒精一100%酒精 一100%酒精一酒精/二甲苯一二甲苯 一二甲苯一中性树胶封片。 未注明时间的一律处理2-3min。 Dr.Tian 2002

染色与观察 • 1%苏木色精（5min）——水洗——0.5%盐 酸分色（数秒）——水洗——0.4%氨水蓝 化——水洗（ 5min ）——70%酒精—— 80%酒精——1%伊红（95%酒精溶解）— —95%酒精——95%酒精——100%酒精— —100%酒精——酒精/二甲苯——二甲苯— —二甲苯——中性树胶封片。 • 未注明时间的一律处理2-3min

五、作业 简述石蜡切片过程，绘制你所观察到的细 胞形态。 ·提交一张你认为制作较好的玻片。 Dr.Tian 2002

五、作业 • 简述石蜡切片过程，绘制你所观察到的细 胞形态。 • 提交一张你认为制作较好的玻片