内蒙古农业大学：《家畜繁殖学》课程教学课件（PPT讲稿）第八章 配子与胚胎生物工程 Biotechnologies of Gametes and Embryos（8/12）

（二）、细胞核移植的方法 1、核供体细胞的准备 胚胎细胞、体细胞、ES细胞 1）、胚胎细胞作为核供体 ➢先用1%的链酶蛋白酶或pH2.5的台氏液去 掉透明带，再用机械吹打或酶消化发使其 分散为单个游离的卵裂球。 ➢一般选择16～32-细胞期或晚期桑椹的胚胎 细胞较为合适

（二）、细胞核移植的方法 1、核供体细胞的准备 胚胎细胞、体细胞、ES细胞 1）、胚胎细胞作为核供体 ➢先用1%的链酶蛋白酶或pH2.5的台氏液去 掉透明带，再用机械吹打或酶消化发使其 分散为单个游离的卵裂球。 ➢一般选择16～32-细胞期或晚期桑椹的胚胎 细胞较为合适

2）、体细胞作为核供体 ➢经0.25%胰蛋白酶+0.1%EDTA消化后， 将细胞接种培养于DMEM 。之后放入 5%CO2培养箱中培养，待细胞长至 70%～80%时进行传代。传代3～8代的 细胞用于核移植。 3）、胚胎干细胞作为核供体 ➢ES细胞既具有胚胎细胞所不具备的数量 优势，又具有体细胞所不能保持的低分 化。ES细胞是全能的，在一定条件下， 它可以分化成各种功能细胞

2）、体细胞作为核供体 ➢经0.25%胰蛋白酶+0.1%EDTA消化后， 将细胞接种培养于DMEM 。之后放入 5%CO2培养箱中培养，待细胞长至 70%～80%时进行传代。传代3～8代的 细胞用于核移植。 3）、胚胎干细胞作为核供体 ➢ES细胞既具有胚胎细胞所不具备的数量 优势，又具有体细胞所不能保持的低分 化。ES细胞是全能的，在一定条件下， 它可以分化成各种功能细胞

2、受体卵母细胞的准备 ➢ 大量实验表明，MII期卵母细胞适用于所有 的供体核，目前基本上都采用去核的MII期 卵母细胞作为受体胞质。 ➢ 受体卵母细胞在核移植前需要进行去核。 ➢ 目前常用的去核方法有如下几种：盲吸法， 荧光引导去核法，微分干涉及极性显微镜去 核法，离心去核法，化学试剂去核法，末期 去核法，吸引法去核，挤压法去核，点击法 去核

2、受体卵母细胞的准备 ➢ 大量实验表明，MII期卵母细胞适用于所有 的供体核，目前基本上都采用去核的MII期 卵母细胞作为受体胞质。 ➢ 受体卵母细胞在核移植前需要进行去核。 ➢ 目前常用的去核方法有如下几种：盲吸法， 荧光引导去核法，微分干涉及极性显微镜去 核法，离心去核法，化学试剂去核法，末期 去核法，吸引法去核，挤压法去核，点击法 去核

1）、盲吸法：吸取极体附近的部分细胞质。 PB1

1）、盲吸法：吸取极体附近的部分细胞质。 PB1

2）、荧光引导去核法：用Hoechst 33342（2～ 8mg/ml）染色10～15min，然后，在荧光显微镜 下确定核的位置

2）、荧光引导去核法：用Hoechst 33342（2～ 8mg/ml）染色10～15min，然后，在荧光显微镜 下确定核的位置

4）、离心去核法：根据细胞核的密度大于细胞质，用 离心的方法可使没有透明带的卵母细胞核被甩向一 侧而最后脱离卵母细胞。 5）、化学试剂去核法：用化学试剂处理处于第一次减 数分裂中期的小鼠卵母细胞，使染色体相互紧密结 合，形成染色体复合体，在卵母细胞排出PB1时， 染色体复合体随PB1一起排出。 6）、末期去核法：激活处理成熟卵母细胞，使其排出 PB2，然后吸取其周围附近的细胞质。 7）、吸引法去核：在注入核供体的同时吸引除掉原有 卵母细胞核

4）、离心去核法：根据细胞核的密度大于细胞质，用 离心的方法可使没有透明带的卵母细胞核被甩向一 侧而最后脱离卵母细胞。 5）、化学试剂去核法：用化学试剂处理处于第一次减 数分裂中期的小鼠卵母细胞，使染色体相互紧密结 合，形成染色体复合体，在卵母细胞排出PB1时， 染色体复合体随PB1一起排出。 6）、末期去核法：激活处理成熟卵母细胞，使其排出 PB2，然后吸取其周围附近的细胞质。 7）、吸引法去核：在注入核供体的同时吸引除掉原有 卵母细胞核