内蒙古农业大学：《家畜繁殖学》课程教学课件（PPT讲稿）第八章 配子与胚胎生物工程 Biotechnologies of Gametes and Embryos（5/12）

（七）、胚胎的保存 • 1、异种活体保存 • 2、常温保存 • 3、低温保存 • 4、超低温保存

（七）、胚胎的保存 • 1、异种活体保存 • 2、常温保存 • 3、低温保存 • 4、超低温保存

• 1）、常规的慢速冷冻 • 尽管低温生物学有了许多发展，但新的胚胎冷冻方法却很少用 于生产实践。目前，大多数的哺乳动物胚胎采用传统的慢速冷冻 方法冷冻保存，使用渗透较快的低温保护剂，缓慢的冷却速度和 比较快的解冻速度。传统的慢速冷冻方法分为以下几步：1）室 温下胚胎置于小分子量可渗低温保护溶液中（如乙二醇、甘油、 二甲基亚枫或丙二醇），且在胚胎和冷冻保护液之间达到平衡； 2）一般在-5℃～-7℃植冰；3）可控的、缓慢降温（0.33～ 1.0℃／分）；4）降温到-30℃或-70℃时，投入液氮中保存；5） 快速解冻；6）在培养或移植前，在室温下除去低温保护剂，为 保持细胞的正常生理功能。每一步冷冻方法都是至关重要的。 4、超低温保存

• 1）、常规的慢速冷冻 • 尽管低温生物学有了许多发展，但新的胚胎冷冻方法却很少用 于生产实践。目前，大多数的哺乳动物胚胎采用传统的慢速冷冻 方法冷冻保存，使用渗透较快的低温保护剂，缓慢的冷却速度和 比较快的解冻速度。传统的慢速冷冻方法分为以下几步：1）室 温下胚胎置于小分子量可渗低温保护溶液中（如乙二醇、甘油、 二甲基亚枫或丙二醇），且在胚胎和冷冻保护液之间达到平衡； 2）一般在-5℃～-7℃植冰；3）可控的、缓慢降温（0.33～ 1.0℃／分）；4）降温到-30℃或-70℃时，投入液氮中保存；5） 快速解冻；6）在培养或移植前，在室温下除去低温保护剂，为 保持细胞的正常生理功能。每一步冷冻方法都是至关重要的。 4、超低温保存

胚胎装管图

胚胎装管图

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• 2）、玻璃化冷冻 • 玻璃化冷冻定义为在冷冻液处于完全玻璃化状 态下冷冻保存细胞，组织或器官（Rall，1985）。 为在一定冷冻速度下形成玻璃化（直接投入液氮， -2500℃/分）。需要使用高浓度的可渗低温保护 剂，然而，浓度过高会对细胞有毒害作用。从理 论上讲，如果要以-1500℃/分的速率进行降温， 那么，1.5M的任何低温保护剂都可以形成玻璃 化，但这需要昂贵而复杂的仪器。近几年，人们 通过减少冷冻液的体积和冷冻液与冷冻和解冻直 接接触的方法来提高冷冻和解冻速度，从而最大 限度的减少冷冻液对胚胎的损害，其中OPS法 （Vajta，1998a；1998b）和cryoloop（Arav， 1997；Martino，1996；Papis，2000）法获 得较好的效果。 •

• 2）、玻璃化冷冻 • 玻璃化冷冻定义为在冷冻液处于完全玻璃化状 态下冷冻保存细胞，组织或器官（Rall，1985）。 为在一定冷冻速度下形成玻璃化（直接投入液氮， -2500℃/分）。需要使用高浓度的可渗低温保护 剂，然而，浓度过高会对细胞有毒害作用。从理 论上讲，如果要以-1500℃/分的速率进行降温， 那么，1.5M的任何低温保护剂都可以形成玻璃 化，但这需要昂贵而复杂的仪器。近几年，人们 通过减少冷冻液的体积和冷冻液与冷冻和解冻直 接接触的方法来提高冷冻和解冻速度，从而最大 限度的减少冷冻液对胚胎的损害，其中OPS法 （Vajta，1998a；1998b）和cryoloop（Arav， 1997；Martino，1996；Papis，2000）法获 得较好的效果。 •

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3）、胚胎的解冻 • a、常规冷冻法的解冻方法 • b、玻璃化冷冻的解冻方法

3）、胚胎的解冻 • a、常规冷冻法的解冻方法 • b、玻璃化冷冻的解冻方法

（ 八）胚胎的 移植：手术和 非手术法 1、 手术法移 植（各种家畜 和实验动物） 在受体腹部作 一切口，找到 排卵一侧的卵 巢并观察黄体 发育情况，然 后用注射器或 移植管将含有 胚胎的培养液 或冲冼液注入 到子宫角内或 输卵管内

（ 八）胚胎的 移植：手术和 非手术法 1、 手术法移 植（各种家畜 和实验动物） 在受体腹部作 一切口，找到 排卵一侧的卵 巢并观察黄体 发育情况，然 后用注射器或 移植管将含有 胚胎的培养液 或冲冼液注入 到子宫角内或 输卵管内

山 羊 胚 胎 移 植

山 羊 胚 胎 移 植

2、牛胚胎非手术移植示意图

2、牛胚胎非手术移植示意图