重庆医科大学：基础医学实验教学课件（PPT讲稿）1.小吞噬实验

实验一中性粒细胞吞噬功能测定细菌计数法

实验一 中性粒细胞吞噬功能测定 ——细菌计数法

一、实验内容1.细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功能（小组做）

一、实验内容 1. 细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功能 (小组做)

二、目的与要求1.了解中性粒细胞生物学特性及其意义。2.熟悉“细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功能”试验的原理、方法及用途

二、目的与要求 1.了解中性粒细胞生物学特性及其意义。 2.熟悉“细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功 能”试验的原理、方法及用途

[实验原理］中性粒细胞一来源于骨髓造血干细胞：?占白细胞总数的60%~70%；生命周期短，不能分裂，靠“造血”补充；胞核呈多叶状；胞质内分布着不能被苏木紫、伊红等染色的颗粒内含髓过氧化物酶、防御素、溶菌酶、组织蛋白酶、乳铁蛋白、碱性磷酸酶等。中性粒细胞特有，巨噬细胞没有这种酶为中性粒细胞在细胞化学上的标志

[实验原理] 中性粒细胞——来源于骨髓造血干细胞； 占白细胞总数的60%~70%； 生命周期短，不能分裂，靠“造血”补充； 胞核呈多叶状；胞质内分布着不能被苏木紫、伊红 等染色的颗粒； 内含髓过氧化物酶、防御素、溶菌酶、组织蛋白酶、乳铁 蛋白、碱性磷酸酶等。 中性粒细胞特有，巨噬细胞没有这种酶， 为中性粒细胞在细胞化学上的标志

中性粒细胞通过趋化、调理、吞入和杀菌等步骤，吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物；中性粒细胞产生伪足包围异物吞噬体或吞噬泡吞噬呼吸爆发产生大量过氧化物及超氧化物等毒性效应分子杀死吞噬的细菌等异物：同时，中性粒细胞本身也死亡成为脓细胞

中性粒细胞通过趋化、调理、吞入和杀菌等步骤，吞 噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物； 中性粒细胞产生伪足包围异物——吞噬体或吞噬泡； 吞噬——呼吸爆发——产生大量过氧化物及超氧化物 等毒性效应分子——杀死吞噬的细菌等异物； 同时，中性粒细胞本身也死亡， 成为脓细胞

中性粒细胞：A.在抗化脓性细菌感染中起重要防御作用：B.引起感染部位急性炎症反应C.参与超敏反应（如II型超敏反应），引起机体免疫病理损伤

中性粒细胞： A.在抗化脓性细菌感染中起重要防御作用； B.引起感染部位急性炎症反应； C.参与超敏反应（如Ⅲ型超敏反应），引起 机体免疫病理损伤

细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功能一小吞噬实验血液中的中性粒细胞（即小吞噬细胞）具有吞噬病原微生物等异物微粒的能力。将新鲜血液和细菌混合，经合适时间后涂片染色即能观察到被吞噬到中性粒细胞内但还未被消化掉的细菌检测中性粒细胞吞噬细菌的能力，可作为辅助判断机体非特异性免疫力的指标之一

血液中的中性粒细胞(即小吞噬细胞)具有吞噬病 原微生物等异物微粒的能力。 将新鲜血液和细菌混合，经合适时间后涂片染色， 即能观察到被吞噬到中性粒细胞内但还未被消化 掉的细菌。 检测中性粒细胞吞噬细菌的能力，可作为辅助判 断机体非特异性免疫力的指标之一。 细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功能 ——小吞噬实验

检测指标：1.吞噬百分率=100个细胞中吞噬有细菌的细胞数X 100%100人吞噬百分率正常参考值：62%~76%2.吞噬指数=100个中性粒细胞吞噬的细菌总数100人吞噬指数正常参考值：1.32~1.72

检测指标： 1. 吞噬百分率＝ 100个细胞中吞噬有细菌的细胞数 人吞噬百分率正常参考值：62%~76% 100 × 100% 2. 吞噬指数＝ 100个中性粒细胞吞噬的细菌总数 人吞噬指数正常参考值：1.32~1.72 100

实验材料(1）显微镜、香柏油、小试管、载玻片、消毒液、吸管、水浴箱等。2）肝素抗凝试管、瑞氏染液。3）菌液制备：白色葡萄球菌18～24小时肉汤培养物，经McFarland比浊法调整浓度至6～9×109/mL加热100℃15分钟杀死细菌，置4℃保存备用

(1)显微镜、香柏油、小试管、载玻片、消毒液、吸 管、水浴箱等。 (2)肝素抗凝试管、瑞氏染液。 (3)菌液制备：白色葡萄球菌18～24小时肉汤培养物 ，经Mc Farland比浊法调整浓度至6～9×109/mL， 加热100℃ 15分钟杀死细菌，置4℃保存备用。 实验材料

实验方法(1)仔细消毒后，每个班取5m1静脉血于肝素抗凝管内（轻轻摇匀）。(2)全班取2m1抗凝血于抗凝管内，再加入1ml备好的白色葡萄球菌菌液（血液：菌液=2：1），充分混匀后，置37℃水浴16min，中途混匀1次。(3)取出EP管，用吸管吹打混匀后，取1滴“全血-白色葡萄球菌混合液”置于洁净载玻片上，用另一载玻片“推”成薄血涂片。(4)待血涂片自然凉干后，用瑞氏染液染色

(1)仔细消毒后，每个班取5ml静脉血于肝素抗凝管 内（轻轻摇匀）。 实验方法 (3)取出EP管，用吸管吹打混匀后，取1滴“全血-白 色葡萄球菌混合液”置于洁净载玻片上，用另一载玻 片“推”成薄血涂片。 (2)全班取2ml抗凝血于抗凝管内，再加入1ml备好的 白色葡萄球菌菌液(血液:菌液=2:1)，充分混匀后， 置37℃水浴16min，中途混匀1次。 (4)待血涂片自然凉干后，用瑞 氏染液染色