延安大学：《生理学 Human Physiology》实验教学_内分泌和生殖实验_实验四十五 妊娠诊断试验

实验四十五妊娠诊断试验 人绒毛膜促性腺激素( human chorionicgonadotropin,HCG)是由胎盘绒毛膜滋养层细胞分泌 的一种糖蛋白激素。在受孕后10~14天开始分泌,60~70天达到高峰,以后逐渐降低,于120天左右 降至较低水平,并一直维持至妊娠末。HCG存在于孕妇的血液中,并从尿液排出。在整个妊娠过程 中,尿中HGG含量的动态变化与血液相似。因为HCG在妊娠早期即出现,所以检测母体血中或尿中的 HCG,可以作为诊断早孕的准确指标。检测HG的方法很多,早期主要用生物鉴定法,近年来,随着 免疫学技术的发展,主要用免疫学的检测方法 、雄蟾蜍排精试验 原理 HG有刺激雄性青蛙或蟾蜍排出精子的作用,即将含有HCG的尿液或血清注射给雄性 青蛙或蟾蜍,能促其排精。因此,用这种排精效应为指标,来确证妇女尿中HCG的存在,就可以作为 早期妊娠诊断的一种辅助方法。 实验对象早孕妇女、雄蟾蜍或青蛙 器材和用品滴管、显微镜、玻片、注射器及针头、早孕妇女被检尿液 方法与步骤 l.选择体壮的雄蟾蜍或青蛙,用滴管插λ泄殖腔内,吸取少量液体,镜检观察有无精子。若无 精子,即可供试验用:若有精子,则需另选 2.以清洁注射器,取5ml被检尿液注入雄蟾蜍背部或腹部皮下。拔出针头后,用手指压住针眼一 会儿,以防注入液外溢。 3.将试验蟾蜍放在温暖湿润的地方,于注射后3~6小时,用滴管在泄殖腔内吸取少量液体,镜 检观察有无精子。找到精子为阳性,若无精子为阴性。 为了判断更为准确,对于阴性反应,应于注射后24小时时,再吸取泄殖腔液复查一次。 注意事项: 1.抽取泄殖腔液体的滴管管口应光滑,以免损伤组织,若泄殖腔内液体量太少,可用滴管先注 入少量任氏液,然后再吸出 2.泄殖腔内可能有原生动物,观察时应与精子区别。蟾蜍或青蛙的精子头部呈长镰刀状,其后 有一鞭毛状的长尾。 、胶乳凝集抑制试验 原理 HG是一种糖蛋白,作为抗原注入家兔体内,可使其产生相应的抗HCG抗体。当这种 抗体与抗原接触时,即可相互结合,但这种反应不能为肉眼所见。用化学方法将HCG交联在聚苯乙稀 胶乳颗粒上,成为HCG抗原,当此抗原与抗HCG抗体结合时,就能见到胶乳颗粒的凝集 如尿中HCG含量增高,加入相应量的抗HCG血清充分作用后,其中的抗体便被尿中的HCG结合,再 加入HCG胶乳抗原,本该凝集的反应受到抑制,而不发生凝集现象。说明尿中有HCG,即为妊娠反应

实验四十五 妊娠诊断试验 人绒毛膜促性腺激素（human chorionicgonadotropin, HCG）是由胎盘绒毛膜滋养层细胞分泌 的一种糖蛋白激素。在受孕后10～14天开始分泌，60～70天达到高峰，以后逐渐降低，于120天左右 降至较低水平，并一直维持至妊娠末。HCG存在于孕妇的血液中，并从尿液排出。在整个妊娠过程 中，尿中HCG含量的动态变化与血液相似。因为HCG在妊娠早期即出现，所以检测母体血中或尿中的 HCG，可以作为诊断早孕的准确指标。检测HCG的方法很多，早期主要用生物鉴定法，近年来，随着 免疫学技术的发展，主要用免疫学的检测方法。 一、雄蟾蜍排精试验 原理    HCG有刺激雄性青蛙或蟾蜍排出精子的作用，即将含有HCG的尿液或血清注射给雄性 青蛙或蟾蜍，能促其排精。因此，用这种排精效应为指标，来确证妇女尿中HCG的存在，就可以作为 早期妊娠诊断的一种辅助方法。 实验对象早孕妇女、雄蟾蜍或青蛙 器材和用品滴管、显微镜、玻片、注射器及针头、早孕妇女被检尿液 方法与步骤 1.选择体壮的雄蟾蜍或青蛙，用滴管插入泄殖腔内，吸取少量液体，镜检观察有无精子。若无 精子，即可供试验用；若有精子，则需另选。 2.以清洁注射器，取5ml被检尿液注入雄蟾蜍背部或腹部皮下。拔出针头后，用手指压住针眼一 会儿，以防注入液外溢。 3.将试验蟾蜍放在温暖湿润的地方，于注射后3～6小时，用滴管在泄殖腔内吸取少量液体，镜 检观察有无精子。找到精子为阳性，若无精子为阴性。 为了判断更为准确，对于阴性反应，应于注射后24小时时，再吸取泄殖腔液复查一次。 注意事项： 1.抽取泄殖腔液体的滴管管口应光滑，以免损伤组织，若泄殖腔内液体量太少，可用滴管先注 入少量任氏液，然后再吸出。 2.泄殖腔内可能有原生动物，观察时应与精子区别。蟾蜍或青蛙的精子头部呈长镰刀状，其后 有一鞭毛状的长尾。 二、胶乳凝集抑制试验 原理    HCG是一种糖蛋白，作为抗原注入家兔体内，可使其产生相应的抗HCG抗体。当这种 抗体与抗原接触时，即可相互结合，但这种反应不能为肉眼所见。用化学方法将HCG交联在聚苯乙稀 胶乳颗粒上，成为HCG抗原，当此抗原与抗HCG抗体结合时，就能见到胶乳颗粒的凝集。 如尿中HCG含量增高，加入相应量的抗HCG血清充分作用后，其中的抗体便被尿中的HCG结合，再 加入HCG胶乳抗原，本该凝集的反应受到抑制，而不发生凝集现象。说明尿中有HCG，即为妊娠反应

阳性。非孕妇尿中含HCG甚微,不与抗HCG血清的抗体结合,当再加入HCG胶乳抗原时,则可发生特异 性凝集反应,呈细颗粒状沉淀,说明尿中无HCG增高,为妊娠反应阴性。 实验对象早孕妇女 器材和用品抗HCG血清、HCG胶乳抗原悬液、早孕妇女被检尿液、玻片、吸管、搅拌玻棒 方法与步骤 ()定性检测 玻片法 1.用洁净吸管在玻片反应圈内滴加被检尿液1滴。 2.再滴加抗HCG血清l滴,用玻棒搅匀,使液面直径达2cm大小,连续缓慢摇动玻片1分钟左右 3.再滴加HCG胶乳抗原悬液,用玻棒搅匀,连续缓慢摇动玻片2分钟,观察结果。如在2~3分种 内出现明显的均匀一致的凝集颗粒者为阴性;呈均匀乳液状无凝集现象者为阳性。必要时应用非妊 娠尿液作对照试验。 检孕卡法 将HCG胶乳抗原和抗HCG血清,分别冷冻干固在卡片的两个试剂圈内(作好的卡片,可直接购 买),用受检尿液溶解抗HG血清,生理盐水溶解HG胶乳抗原。30秒后,将左右两边的液体混合, 作胶乳凝集抑制试验。结果的判定同玻片法。 定量检测 1.取试管4支,分别加入生理盐水0.5、1、2及4ml。 2.每管分别加入上述定性试验阳性尿0.01m1,则稀释度分别为1/50、1/100、1/200及1/400 3.分别取不同稀释倍数的尿液如上法检测。 4.以阳性结果的最高稀释度报告。 注意事项 1.抗HCG血清与HCG胶乳抗原试剂应放于4℃冰箱内保存,但不能冰冻,使用时应使其接近室温, 并事先摇匀。 2.实验室温度应在15℃以上,如室温过低,反应则缓慢,观察时间应延长。 此试验以晨尿为好。如尿液混浊则应离心沉淀后取上清液使用。 4.滴加尿液、抗HCG血清、HCG胶乳抗原试剂时,液滴大小应均匀一致

阳性。非孕妇尿中含HCG甚微，不与抗HCG血清的抗体结合，当再加入HCG胶乳抗原时，则可发生特异 性凝集反应，呈细颗粒状沉淀，说明尿中无HCG增高，为妊娠反应阴性。 实验对象早孕妇女 器材和用品抗HCG血清、HCG胶乳抗原悬液、早孕妇女被检尿液、玻片、吸管、搅拌玻棒。 方法与步骤 ㈠定性检测 玻片法 1.用洁净吸管在玻片反应圈内滴加被检尿液1滴。 2.再滴加抗HCG血清1滴，用玻棒搅匀，使液面直径达2cm大小，连续缓慢摇动玻片1分钟左右。 3.再滴加HCG胶乳抗原悬液，用玻棒搅匀，连续缓慢摇动玻片2分钟，观察结果。如在2～3分种 内出现明显的均匀一致的凝集颗粒者为阴性；呈均匀乳液状无凝集现象者为阳性。必要时应用非妊 娠尿液作对照试验。 检孕卡法 将HCG胶乳抗原和抗HCG血清，分别冷冻干固在卡片的两个试剂圈内（作好的卡片，可直接购 买），用受检尿液溶解抗HCG血清，生理盐水溶解HCG胶乳抗原。30秒后，将左右两边的液体混合， 作胶乳凝集抑制试验。结果的判定同玻片法。 ㈡定量检测 1.取试管4支，分别加入生理盐水0.5、1、2及4ml。 2.每管分别加入上述定性试验阳性尿0.01ml,则稀释度分别为1/50、1/100、1/200及 1/400。 3.分别取不同稀释倍数的尿液如上法检测。 4.以阳性结果的最高稀释度报告。 注意事项 1.抗HCG血清与HCG胶乳抗原试剂应放于4℃冰箱内保存，但不能冰冻，使用时应使其接近室温， 并事先摇匀。 2.实验室温度应在15℃以上，如室温过低，反应则缓慢，观察时间应延长。 3.此试验以晨尿为好。如尿液混浊则应离心沉淀后取上清液使用。 4.滴加尿液、抗HCG血清、HCG胶乳抗原试剂时，液滴大小应均匀一致