《微生物学》课程教学资源（文献资料，打印版）细菌数量的测定方法

细菌数量的测定方法 1、计数器测定法： 即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血 细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一 定的(0.1mm3),因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含 菌数。本法简便易行，可立即得出结果。 本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。 2、电子计数器计数法： 电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能 通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一 个脉冲，自动记录在电子记录装置上。 该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为 细菌。因此，要求菌悬液中不含任何碎片。 3、活细胞计数法 常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落 的原理设计的。取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将 定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中 的活菌数。此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前

国际上许多国家所采用的方法。使用该法应注意：①一般选取菌落数 在30~300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确：②为了防止 菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入0.001%2,3,5一氯化三 苯基四氨唑(TTC):③本法限用于形成菌落的微生物。 广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最 常用的活菌计数法。 4、比浊法 比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮 液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可 用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。 此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的 细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。 5、测定细胞重量法 此法分为湿重法和干重法。湿重法系单位体积培养物经离心后将 湿菌体进行称重：干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放 人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。 此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常 用方法

6、测定细胞总氮量或总碳量 氮、碳是细胞的主要成分，含量较稳定，测定氮、碳的含量可以 推知细胞的质量。此法适于细胞浓度较高的样品。 7、颜色改变单位法(colour change unit,简称CCU) 这种方法通常用于很小，用一般的比浊法无法计数的微生物，比 如支原体等，因为支原体的液体培养物是完全透明的，呈现为清亮透 明红色，国此无法用比浊法来计数，由于支原体固体培养很困难，用 cfu法也不容易计数，因此需要用特殊的计数方法，即CCU法。它是 以微生物在培养基中的代谢活力为指标，来计数微生物的相对含量 的，下面以解脲脲原体为例，简单介绍其操作： (1)取12只无菌试管，每一管装1.8ml解脲脲原体培养基。 (2)在第一管加入0.2ml待测解脲脲原体菌液，充分混匀，从中吸 取0.2ml加入第二管，依次类推，10倍梯度稀释，一直到最末一管 (3)于37度培养，以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的 CCU,也就是支原体的最大代谢活力，比如第六管出现颜色改变，他 的相对浓度就是10的6次方CCU/ml 一般来说，比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计 数，但是对支原体这样比较特殊的微生物，用CCU法比较合适

测定微生物生长的方法很多，各种方法均有其优缺点，也不是在 任何情况下都适用。在微生物学工作中一般常用的是平皿菌落计数 法、计数器法和比浊法