贵州大学：《细胞生物学》课程教学资源（PPT课件讲稿）第二章 研究方法

卟物学 CELL BIOLOGY 樊庆杰 qjfan(@126.com

樊 庆 杰 qjfan@126.com

第二章研究 第一节显微技术 ■显微镜是观察细胞的主要工具 ■根据光源不同,可分为光学显微镜和电子显微镜两大 方类。前者以可见光(紫外线显微镜以紫外光)为光源, 法后者则以电子束为光源

第一节 显微技术 ◼ 显微镜是观察细胞的主要工具。 ◼ 根据光源不同，可分为光学显微镜和电子显微镜两大 类。前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光源， 后者则以电子束为光源。 第 二 章 研 究 方 法 第 二 章 研 究 方 法

光学显微镜 ■普通光学显微镜 ■荧光显微镜 ■激光共聚焦扫描显微镜 暗视野显微镜 ■相差显微镜 NEXT

一、光学显微镜 ◼ 普通光学显微镜 ◼ 荧光显微镜 ◼ 激光共聚焦扫描显微镜 ◼ 暗视野显微镜 ◼ 相差显微镜 NEXT

普通光学显微镜 ■普通生物显微镜由3部分构成,即:①照明系统,包 括光源和聚光器;②光学放大系统,由物镜和目镜组 成,是显微镜的主体,为了消除球差和色差,目镜和 物镜都由复杂的透镜组构成;③机械装置,用于固定 材料和观察。 ■显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数,还与显微 镜的分辨力( resolution)有关。分辨力是指显微镜 (或人的眼睛距目标25cm处)能分辨物体最小间隔的 能力

普通光学显微镜 ◼ 普通生物显微镜由3 部分构成，即：①照明系统，包 括光源和聚光器；②光学放大系统，由物镜和目镜组 成，是显微镜的主体，为了消除球差和色差，目镜和 物镜都由复杂的透镜组构成；③机械装置，用于固定 材料和观察。 ◼ 显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数，还与显微 镜的分辨力（resolution）有关。分辨力是指显微镜 （或人的眼睛距目标25cm 处）能分辨物体最小间隔的 能力

荧光显微镜 ■细胞中有些物质,如叶绿素 等,受紫外线照射后可发荧 光;另有一些物质本身虽不 能发荧光,但如果用荧光染 料或荧光抗体染色后,经紫 外线照射亦可发荧光,荧光 显微镜就是对这类物质进行 定性和定量研究的工具之一

荧光显微镜 ◼ 细胞中有些物质，如叶绿素 等，受紫外线照射后可发荧 光；另有一些物质本身虽不 能发荧光，但如果用荧光染 料或荧光抗体染色后，经紫 外线照射亦可发荧光，荧光 显微镜就是对这类物质进行 定性和定量研究的工具之一

激光共聚焦扫描显微镜 ■激光共聚焦扫描显徼镜用激 光作扫描光源,逐点、逐行 逐面快速扫描成像。 统经一次调焦,扫描限制在 样品的一个平面内。调焦深 度不一样时,能显示细胞样 品的立体结构

激光共聚焦扫描显微镜 ◼ 激光共聚焦扫描显微镜用激 光作扫描光源，逐点、逐行、 逐面快速扫描成像。 ◼ 统经一次调焦，扫描限制在 样品的一个平面内。调焦深 度不一样时，能显示细胞样 品的立体结构

暗视野显微镜 ■暗视野显微镜( dark field microscope)的聚光镜中央有 挡光片,使照明光线不直接进人物镜,只允许被标本 反射和衍射的光线进入物镜,因而视野的背景是黑的, 物体的边缘是亮的。 ■利用这种显微镜能见到小至4~200nm的微粒子,分辨 率可比普通显微镜高50倍

暗视野显微镜 ◼ 暗视野显微镜（dark field microscope）的聚光镜中央有 挡光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本 反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的， 物体的边缘是亮的。 ◼ 利用这种显微镜能见到小至4~200nm 的微粒子，分辨 率可比普通显微镜高50 倍

相差显微镜 ■相差显微镜( phasecontrast microscope)由P. Zernike 于1932年发明,并因此获1953年诺贝尔物理奖 ■这种显微镜最大的特点是可以观察未经染色的标本和 活细胞

相差显微镜 ◼ 相差显微镜（phasecontrast microscope）由P．Zernike 于1932年发明，并因此获1953 年诺贝尔物理奖。 ◼ 这种显微镜最大的特点是可以观察未经染色的标本和 活细胞

电子显微镜 ■透射电子显微镜 在光学显微镜下无法看清小于0.2μm的细微结构,这 些结构称为亚显微结构或超微结构。要想看清这些结 构,就必须选择波长更短的光源,以提高显微镜的分 辨率。 ■1932年 Ruska发明了以电子束为光源的透射电子显微 镜( transmission electron microscope,TEM)。目前 TEM的分辨力可达0.2nm

二、电子显微镜 ◼ 透射电子显微镜 ◼ 在光学显微镜下无法看清小于0.2μm 的细微结构，这 些结构称为亚显微结构或超微结构。要想看清这些结 构，就必须选择波长更短的光源，以提高显微镜的分 辨率。 ◼ 1932 年Ruska 发明了以电子束为光源的透射电子显微 镜（transmission electron microscope，TEM）。目前 TEM 的分辨力可达0.2nm

电子显微镜 扫描电子显微镜 在光学显微镜下扫描电子显微镜( scanning electron mIcroscope,SEM)于20世纪60年代问世,用来观察 标本的表面结构。 ■其工作原理是用一束极细的电子束扫描样品,在样 表面激发出次级电子,图像为立体形象,反映了标本 的表面结构

二、电子显微镜 ◼ 扫描电子显微镜 ◼ 在光学显微镜下扫描电子显微镜（scanning electron microscope，SEM）于20 世纪60 年代问世，用来观察 标本的表面结构。 ◼ 其工作原理是用一束极细的电子束扫描样品，在样品 表面激发出次级电子，图像为立体形象，反映了标本 的表面结构