《生物化学》课程PPT教学课件：第二十二章 常用分子生物学技术的原理及应用用

第二十二章 常用分子物学故术 的原理及粒用 The Popular Technology in Molecular Biology: Principle and Application 司心囗录

目 录 第二十二章 常用分子生物学技术 的原理及应用 The Popular Technology in Molecular Biology: Principle and Application

第 分子杂交与印迹技术 Molecular Hybridization Blotting Technology 司心囗录

目 录 第 一 节 分子杂交与印迹技术 Molecular Hybridization & Blotting Technology

分子杂交与印迹技术的原理 核酸分子杂交( nucleic acid hybridization) 在DNA复性过程中,如果把不同DNA单链 分子放在同一溶液中,或把DNA与RNA放在 起,只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定 的碱基配对关系,就可以在不同的分子之间形 成杂化双链( heteroduplex)。 司心囗录

目 录 核酸分子杂交 (nucleic acid hybridization ) 在DNA复性过程中，如果把不同DNA单链 分子放在同一溶液中，或把DNA与RNA放在一 起，只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定 的碱基配对关系，就可以在不同的分子之间形 成杂化双链(heteroduplex) 。 一、分子杂交与印迹技术的原理

复性 RNA DNA 司心囗录

目 录 复性 RNA DNA

(一)印迹技术 (二)探针技术 探针( probe) 小段用同位素、生物素或荧光染料标 标记其末端或全链的已知序列的多聚核苷酸, 与固定在NC膜上的核苷酸结合,判断是否 有同源的核酸分子存在。 司心囗录

目 录 （一）印迹技术 （二）探针技术 探针 (probe) 一小段用同位素、生物素或荧光染料标 标记其末端或全链的已知序列的多聚核苷酸， 与固定在NC膜上的核苷酸结合，判断是否 有同源的核酸分子存在

、印迹技术的类别及应用 (一)DNA印迹技术( Southern blotting) 用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体 的分析。 (二)RNA印迹技术( Northern blotting) 用于RNA的定性定量分析。 三)蛋白质的印迹分析( Western blotting 用于蛋白质定性定量及相互作用研究。 司心囗录

目 录 二、印迹技术的类别及应用 （一）DNA印迹技术 (Southern blotting) 用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体 的分析。 （二）RNA印迹技术 (Northern blotting) 用于RNA的定性定量分析。 （三）蛋白质的印迹分析(Western blotting) 用于蛋白质定性定量及相互作用研究

其他 斑点印迹( dot blotting) 原位杂交( in situ hybridization) DNA点阵( DNA array) DNA芯片技术( DNA chip) 司心囗录

目 录 其他 斑点印迹 (dot blotting) 原位杂交 (in situ hybridization) DNA点阵 (DNA array) DNA芯片技术 (DNA chip)

限制性内切酶 RNA样品 酶切DNA溶液 蛋白样品 电泳转移杂交 转移到NC膜后与 转移到NC膜或尼龙膜转移到ⅣC膜或PVDF 标记探针杂交 后与标记探针杂交 膜后与抗体反应 三种印迹技术的比 放或 射化 自学 显显 较 影色 DNA印迹 RNA印迹 蛋白印迹 目录

目 录 三 种 印 迹 技 术 的 比 较

DNA 转移至消酸 纤维滤膜上 限制酶消化(HindⅢ) 加重量 吸潮纸 纸 转移缓神液 硝酸纤维滤膜 琼脂糖凝胶电脉 三|3PDNA探针 杂交 硝酸纤维滤膜 放射自显影 分子杂交实验

分子杂交实验 ① ② ③ 目 录

s E 二 题 放射自显影照片

放射自显影照片 目 录