《高效液相色谱》第二讲 液相色谱实用技术(一)

液相色谱实用技术(一) 色谱柱的使用及保养

液相色谱实用技术（一） 色谱柱的使用及保养

良好的色谱实验习惯 拿到一根新色谱柱时,先测柱效 保留在新色谱柱上测得的色谱图,并记录 条件 定期检测柱效 定期检测仪器的谱带展宽

良好的色谱实验习惯 拿到一根新色谱柱时，先测柱效 保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录 条件 定期检测柱效 定期检测仪器的谱带展宽

色谱柱的使用及操作 流动相的转换 流速(压力)的变化幅度 温度的变化幅度 专用色谱柱:样品及溶剂的要求

色谱柱的使用及操作 流动相的转换 流速(压力)的变化幅度 温度的变化幅度 专用色谱柱 记住∶拿到一根从未用过的色谱柱时 ∶样品及溶剂的要求 一定要先看其使用说明！

色谱柱的保养(-) 样品方面 除去微粒及杂质 了解样品在流动相中的溶解度 如样品的溶剂不是流动相,一定要用流动相试溶 解度,防止其在流动相中析出 了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用

色谱柱的保养（一） 样品方面 除去微粒及杂质 了解样品在流动相中的溶解度 如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶 解度，防止其在流动相中析出 了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用

色谱柱的保养(二) 流动相方面 除去微粒 纯度的要求 超纯水,梯度实验时水中有机杂质含量要低 缓冲液的pH值,在填料的允许范围内 缓冲液(盐)的浓度 溶剂:色谱纯,并与填料相匹配 溶剂中的杂质含量 流动相对样品的溶解度 有机溶剂或水的比例

色谱柱的保养（二） 流动相方面 除去微粒 纯度的要求 超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低 缓冲液的pH值，在填料的允许范围内 缓冲液（盐）的浓度 溶剂：色谱纯，并与填料相匹配 溶剂中的杂质含量 流动相对样品的溶解度 有机溶剂或水的比例

在线的保护装置 给色谱柱提供物理的保护 除去样品及流动相中的颗粒 给色谱柱提供化学的保护 防止分析柱被化学污染 装置 在线过滤器 预装保护柱

在线的保护装置 给色谱柱提供物理的保护 除去样品及流动相中的颗粒 给色谱柱提供化学的保护 防止分析柱被化学污染 装置 在线过滤器 预装保护柱

在线过滤器 In-Line filter 防止颗粒在色谱柱头累积 优点:基本不影响柱效 在需要高柱效的分析时中常用(如:氨基酸 分析)

在线过滤器 In-Line Filter 防止颗粒在色谱柱头累积 优点：基本不影响柱效 在需要高柱效的分析时中常用（如：氨基酸 分析）

保护柱 可避免化学污染。多数保护柱影响到整个 色谱柱的柱效,特别是在用微柱时 保护柱的种类 预装保护柱 有各种填料的预装柱供选择,使用方便。填料容 积较小,也引起柱效降低

保护柱 可避免化学污染。多数保护柱影响到整个 色谱柱的柱效，特别是在用微柱时 保护柱的种类 预装保护柱 有各种填料的预装柱供选择，使用方便。填料容 积较小，也引起柱效降低

可换芯式保护柱 Guard-Pak- Holder WATOB8147 Waters Column older Guard-Pak Insert Guard-Pak- Inserts not included) WAT088141

可换芯式保护柱

色谱柱的清洗 对所做的样品要有充分的了解 用对该样品洗脱能力最强的流动相清洗 硅胶柱的一般方法 先用甲醇洗去极性杂质 用干燥的二氯甲烷、正庚烷100~200m依次活化 键合相柱(烷基)的一般方法 20倍柱体积的:甲醇-氯仿-甲醇-水依次冲洗

色谱柱的清洗 对所做的样品要有充分的了解 用对该样品洗脱能力最强的流动相清洗 硅胶柱的一般方法 先用甲醇洗去极性杂质 用干燥的二氯甲烷、正庚烷100~200ml依次活化 键合相柱(烷基)的一般方法 记住∶每种色谱柱可能有特定的方法 一定要先看其使用说明！ 20倍柱体积的：甲醇-氯仿-甲醇-水依次冲洗