郑州职业技术学院：《病原生物与免疫学基础》实验八 其他微生物及病毒试验

课时授课计划 审签 编号28 授课时间及单元 授课专业及班级 组织教学:考勤、填写教学日志 基本课题:实验八其他微生物及病毒试验 教学目标:1.能初步辨认并画出示教病毒及其它微生物的镜下形态。 2.简述血凝及血凝凝集试验原理、方法及结果分析 (重点、难点) 3.了解 ELISA双抗体测乙型肝炎病毒的方法。 教学内容 教学设计 时间(分) 复习旧课: 与实验有关的知识。 实验八其他微生物及病毒试验 、实验目的 实验内容 (一)观察螺旋体、立克次体、1.同学边画图边观察。30 沙眼衣原体、肺炎支原体、真菌形2.仔细巡视,解答疑难 态及培养物观察 (二)病毒包涵体形态观察 示教 (三)细菌培养结果观察 示教

课 时 授 课 计 划 审签 编号 28 授课时间及单元 授课专业及班级 组织教学：考勤、填写教学日志 1 基本课题：实验八 其他微生物及病毒试验 教学目标： 1．能初步辨认并画出示教病毒及其它微生物的镜下形态。 2．简述血凝及血凝凝集试验原理、方法及结果分析 （重点、难点） 3．了解 ELISA 双抗体测乙型肝炎病毒的方法。 教学内容 教学设计 时间（分） 复习旧课： 9 与实验有关的知识。 实验八 其他微生物及病毒试验 一、实验目的 二、实验内容 （一）观察螺旋体、立克次体、 1．同学边画图边观察。30 沙眼衣原体、肺炎支原体、真菌形 2．仔细巡视，解答疑难。 态及培养物观察 （二）病毒包涵体形态观察 示教。 5 （三）细菌培养结果观察 示教。 5

(四)鸡胚接种 (五)血凝及血凝抑制试验 1.提问原理,演示过程。20 2.师生共同分析结果。 (六) ELISA双抗体测乙型 20 肝炎病毒表面抗原 1.利用板图复习其原理。 2.教师演示过程。 3.师生共同分析结果。 小结:总结试验中的问题。 布置作业与预习 作业:实验报告。 预习:第十五章人类寄生虫概述 课后分析

（四）鸡胚接种 （五）血凝及血凝抑制试验 1. 提问原理，演示过程。 20 2．师生共同分析结果。 （六）ELISA 双抗体测乙型 20 肝炎病毒表面抗原 1．利用板图复习其原理。 2．教师演示过程。 3．师生共同分析结果。 小结 ：总结试验中的问题。 9 布置作业与预习 1 作业：实验报告。 预习：第十五章 人类寄生虫概述 课后分析

实验八其他微生物及病毒试验 、实验目的 1.了解病毒包涵体形态特点及在细胞内的位置 2.了解单层细胞生长特点及现象。 3.了解立克次体、螺旋体、衣原体及真菌形态及染色特点 4.了解乙型肝炎病毒表面抗原的检査方法和结果判定。 、实验内容 )观察螺旋体、立克次体、沙眼衣原体、肺炎支原体、真菌形态及 培养物观察 注意各自的形态特征,染色性等。 (二)病毒包涵体形态观察 狂犬病病毒包涵体标本片显微镜下观察,注意包涵体位于神经细胞浆内, 红色、圆形或卵圆形,大小不等。 (三)细胞培养结果观察 将单层细胞培养管置显微镜下观察细胞的生长现象及细胞病变。 四)鸡胚接种 1.尿囊腔接种法 2.卵黄囊接种法 3.绒毛尿囊膜接种法

实验八 其他微生物及病毒试验 一、实验目的 1. 了解病毒包涵体形态特点及在细胞内的位置。 2. 了解单层细胞生长特点及现象。 3. 了解立克次体、螺旋体、衣原体及真菌形态及染色特点。 4. 了解乙型肝炎病毒表面抗原的检查方法和结果判定。 二、实验内容 （一）观察螺旋体、立克次体、沙眼衣原体、肺炎支原体、真菌形态及 培养物观察 注意各自的形态特征，染色性等。 （二）病毒包涵体形态观察 狂犬病病毒包涵体标本片显微镜下观察，注意包涵体位于神经细胞浆内， 红色、圆形或卵圆形，大小不等。 （三）细胞培养结果观察 将单层细胞培养管置显微镜下观察细胞的生长现象及细胞病变。 （四）鸡胚接种 1．尿囊腔接种法 2．卵黄囊接种法 3．绒毛尿囊膜接种法

4.羊水囊接种法 (五)血凝剂血凝抑制试验 1.血凝试验 (1)原理:某些病毒表面的血凝素能与人“O型、豚鼠和鸡等的红细胞 上的血凝素受体结合,引起红细胞凝集。 (2)方法:取9支小试管,按下表顺序加样。 生理盐0910250250.250.25025023025025 水 0.1 0.250.250250.250.250.230.25 稀释度1:101:201:401:801:1601:3201:6401: 病毒液 1280 对照 05%鸡 红细胞 各管加0.25ml 摇匀,室温静置45min 2.血凝抑制试验 (1)原理:某些病毒加入特异性抗血清后,再加入人的人“O”型、豚鼠 和鸡等的红细胞则不再发生凝集现象。 (2)方法 1)取小试管10支,每管加入0.25m生理盐水 2)取经处理的1:5稀释的病人血清0.25ml,加入第一管内作1:10稀 释,吹打3次,混匀后取0.25m加至第2管,并依次作倍比稀释,至第8管 为止,第9管为病毒对照,第10管为血清对照

4．羊水囊接种法 （五）血凝剂血凝抑制试验 1．血凝试验 （1）原理：某些病毒表面的血凝素能与人“O”型、豚鼠和鸡等的红细胞 上的血凝素受体结合，引起红细胞凝集。 （2）方法：取 9 支小试管，按下表顺序加样。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 生理盐 水 0.9 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 病毒液 0.1 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 病毒液 稀释度 1：10 1：20 1：40 1：80 1：160 1：320 1：640 1： 1280 对照 0.5% 鸡 红细胞 各管加 0.25ml 摇匀，室温静置 45min 2．血凝抑制试验 （1）原理：某些病毒加入特异性抗血清后，再加入人的人“O”型、豚鼠 和鸡等的红细胞则不再发生凝集现象。 （2）方法 1）取小试管 10 支，每管加入 0.25ml 生理盐水。 2）取经处理的 1：5 稀释的病人血清 0.25ml，加入第一管内作 1：10 稀 释，吹打 3 次，混匀后取 0.25ml 加至第 2 管，并依次作倍比稀释，至第 8 管 为止，第 9 管为病毒对照，第 10 管为血清对照

3)每管加入0.25ml含4个血凝单位的新分离病毒液,第10管不加 4)摇匀后每管加入0.5%鸡红细胞0.5m,置室温30min、45min各观察 次结果,以45min的结果为准。 (七) ELISA双抗体测乙型肝炎病毒表面抗原 原理: ELISA法 2.方法:加样、洗涤、加底物、加终止液。 3.结果判断:阳性-蓝色,阴性-无色

3）每管加入 0.25ml 含 4 个血凝单位的新分离病毒液，第 10 管不加。 4）摇匀后每管加入 0.5%鸡红细胞 0.5ml，置室温 30min、45min 各观察 一次结果，以 45min 的结果为准。 （七）ELISA 双抗体测乙型肝炎病毒表面抗原 1. 原理：ELISA 法 2. 方法：加样、洗涤、加底物、加终止液。 3. 结果判断：阳性-蓝色，阴性-无色