湖北中医药大学：《中药药理学实验》课程教学资源（PPT课件讲稿）流式细胞术原理及在中医药研究中应用简介

流式细胞术原理 及在中医药研究中应用简介 湖北中医药大学中医药实验中心田代志

流式细胞术原理 及在中医药研究中应用简介 湖北中医药大学中医药实验中心 田代志

流式细胞术发展史 1930年 Caspersson和 Thorel开始致力于细 胞计数的研究 1934年 Moldaven最早设想细胞检测自动化, 用光电仪记录流过一根毛细管的细胞 1940年Co0ns提出结合荧光素的抗体去标记 细胞内的特定蛋白 1949年 Wallace coulter申请了在悬液中计 数粒子的方法的专利 1950年 Caspersson用显微UVvs检测细胞

流式细胞术发展史 • 1930年Caspersson和Thorell开始致力于细 胞计数的研究 • 1934年Moldaven最早设想细胞检测自动化， 用光电仪记录流过一根毛细管的细胞 • 1940年Coons提出结合荧光素的抗体去标记 细胞内的特定蛋白 • 1949年Wallace Coulter申请了在悬液中计 数粒子的方法的专利 • 1950年Caspersson用显微UV-VIS检测细胞

流式细胞术发展史 1953年 Crosland-ayor应用分层鞘流原理, 成功设计红细胞光学自动计数器 1969年 an dilla及其同事在 Los Alamos NM发明第一台荧光检测细胞计 1972年 Herzenberg研制出细胞分选器 1975年 Kohlers等提出单克隆抗体技术,为 细胞研究提供大量的特异免疫试剂 大量厂家不断生产流式细胞仪

流式细胞术发展史 • 1953年Croslannd-Taylor应用分层鞘流原理， 成功设计红细胞光学自动计数器 • 1969年Van Dilla及其同事在Los Alamos, NM发明第一台荧光检测细胞计 • 1972年Herzenberg研制出细胞分选器 • 1975年Kohler等提出单克隆抗体技术，为 细胞研究提供大量的特异免疫试剂 • 大量厂家不断生产流式细胞仪

流式细胞术发展史 目前国内主要流式细胞仪厂家: Beckton dickinson(BD)公司 一 BACKMAN COULTER公司

流式细胞术发展史 • 目前国内主要流式细胞仪厂家： – Beckton Dickinson(BD)公司 – BACKMAN COULTER公司

流式细胞仪构造 流式细胞仪( Flow Cytometer,FCM)的结构 分五部分: 流动室及液流驱动系统 激光光源及光束成形系统 光学系统 信号检测与存贮、显示、分析系统 细胞分选及浓缩系统 流式细胞术( Flow Cytometry,FCM) 图示如下页:

流式细胞仪构造 • 流式细胞仪(Flow Cytometer，FCM)的结构 分五部分： – 流动室及液流驱动系统 – 激光光源及光束成形系统 – 光学系统 – 信号检测与存贮、显示、分析系统 – 细胞分选及浓缩系统 • 流式细胞术(Flow Cytometry，FCM) 图示如下页：

流式细胞仪构造模式囹 MT5 PMT 4 Sample PMT 3 Dichroic Flow cell Filters PMT 2 Scatter PMT 1 Laser Sensor Bandpass Filters

流式细胞仪构造模式图

流式细胞仪构造示意图 Lg ht From Itp ceIb ater herel Fiters dsect hst w Formed laht Bortngetshon ce k ae calcin w-

流式细胞仪构造示意图

流动空与液流驱动系统 流动室是仪器核心部件,被测样品在此与激光相 交 流动室由石英玻璃制成,中央有一长方形小孔, 供单个细胞通过。 流动室内充满了鞘液,其作用是将样品环形包绕。 鞘液流速稳定,样品流在鞘流的环包下形成流体 动力学聚焦,从而得到准确的细胞荧光信息。 流动室上装有压电晶体,受到振荡信号可发生振 动

流动室与液流驱动系统 • 流动室是仪器核心部件，被测样品在此与激光相 交。 • 流动室由石英玻璃制成，中央有一长方形小孔， 供单个细胞通过。 • 流动室内充满了鞘液，其作用是将样品环形包绕。 • 鞘液流速稳定，样品流在鞘流的环包下形成流体 动力学聚焦，从而得到准确的细胞荧光信息。 • 流动室上装有压电晶体，受到振荡信号可发生振 动

流动室与液流驱动系统 压节 力 力传感器 鞋液 本 Hi Med a 样本压力调节

流动室与液流驱动系统

激光光源及光束成形系统 目前台式机FCM,大多采用氩离子气体激 光器。 激光光束在到达流动室前,先经过透镜聚 焦,形成约22×6m的光斑,这样激光能 量较强,以激发荧光染料。 台式机的整个光路是封闭的,在安装时由 工程师调试完毕后,无需用户作任何调节, 使用十分方便

激光光源及光束成形系统 • 目前台式机FCM，大多采用氩离子气体激 光器。 • 激光光束在到达流动室前，先经过透镜聚 焦，形成约22×66μm的光斑，这样激光能 量较强，以激发荧光染料。 • 台式机的整个光路是封闭的，在安装时由 工程师调试完毕后，无需用户作任何调节， 使用十分方便