西北农林科技大学：《种子学》课程教学资源（实验指导）实验二 种子生活力的四唑染色测定

实验二种子生活力的四唑染色测定 一、目的要求 (1)了解四唑染色测定种子生活力所需试剂和测定原理。 (②)掌握主要种子四唑染色种子生活力的方法和判别有无生活力的鉴定标准。 二、材料、器具和试剂 ()种子材料水稻、小麦、玉米、黑麦草、大豆、棉花、洋葱、甘蓝、番茄、黄瓜 西瓜等种子。 (2)器具冰箱、培养箱、出糙机、定量加样瓶、镊子、解剖针、刀片、吸水纸、不锈 钢网兜等。 (③)试剂2,3,5一氯化三苯基四氮唑、磷酸缓冲液、乳酸苯酚透明剂、过氧化氢、硫 酸钾铝等。 三、方法步骤 (1)水稻种子四唑测定取种子样品200粒，去壳，放纸间或水中30℃条件下预湿12h, 沿种子侧面胚纵切，放人0.1%四唑磷酸缓冲液35℃条件下染色1~2，凡是胚的主要构 造染成正常鲜红色，或胚根尖端三分之二不染色而其他部分正常染色的种子为有生活力种 子。 (2)小麦、玉米种子四唑染色测定取种子样品200粒，放入水中30℃条件下3~4， 或纸间12h,沿胚纵切，浸入0.1%四唑溶液中，35℃条件下，0.5~1h。凡是胚的主要构 造染成正常鲜红色，或盾片上下任一端三分之一不染的（小麦胚根大部不染色，但不定根原 基染色)，为有生活力种子。如盾片中央有不染色，表明己受热损伤，作为无生活力种子。 (③)黑麦草种子四唑染色测定取样200粒种，先用0.3%过氧化氢液浸种3一4，或 清水浸种6~18h,靠近胚横切去上大半粒种子，将带有胚一端种子浸入0.1%四唑溶液30 ℃条件下6一24山，倒去四唑溶液，并吸去残液后，再加滴入乳酸苯酚液，在35℃条件下 30i。凡是胚全部染成红色，或仅胚根尖端三分之二不染色的，为有生活力种子。 (④)大豆种子四唑测定取大豆种子样品200粒种子，放在湿毛巾间预湿12山，一般需 剥去种皮，然后浸入1%四唑溶液，35℃条件下2~3泓。凡是整个种子染色正常明亮鲜红， 或仅胚根尖端二分之一不染色，或子叶顶端（离胚芽端）二分之一不染色的为有生活力种子。 (5)棉花种子四唑染色测定取种子样品200粒，放纸间预湿，30℃条件下12h,纵切

实验二 种子生活力的四唑染色测定 一、目的要求 (1)了解四唑染色测定种子生活力所需试剂和测定原理。 (2)掌握主要种子四唑染色种子生活力的方法和判别有无生活力的鉴定标准。 二、材料、器具和试剂 (1)种子材料 水稻、小麦、玉米、黑麦草、大豆、棉花、洋葱、甘蓝、番茄、黄瓜、 西瓜等种子。 (2)器具 冰箱、培养箱、出糙机、定量加样瓶、镊子、解剖针、刀片、吸水纸、不锈 钢网兜等。 (3)试剂 2，3，5—氯化三苯基四氮唑、磷酸缓冲液、乳酸苯酚透明剂、过氧化氢、硫 酸钾铝等。 三、方法步骤 (1)水稻种子四唑测定 取种子样品 200 粒，去壳，放纸间或水中 30℃条件下预湿 12h， 沿种子侧面胚纵切，放人 0.1％四唑磷酸缓冲液 35℃条件下染色 l～2 h，凡是胚的主要构 造染成正常鲜红色，或胚根尖端三分之二不染色而其他部分正常染色的种子为有生活力种 子。 (2)小麦、玉米种子四唑染色测定 取种子样品 200 粒，放入水中 30℃条件下 3～4 h， 或纸间 12 h，沿胚纵切，浸入 0.1％四唑溶液中，35℃条件下，0.5～1 h。凡是胚的主要构 造染成正常鲜红色，或盾片上下任一端三分之一不染的(小麦胚根大部不染色，但不定根原 基染色)，为有生活力种子。如盾片中央有不染色，表明已受热损伤，作为无生活力种子。 (3)黑麦草种子四唑染色测定 取样 200 粒种，先用 0.3％过氧化氢液浸种 3～4 h，或 清水浸种 6～18 h，靠近胚横切去上大半粒种子，将带有胚一端种子浸入 0.1％四唑溶液 30 ℃条件下 6～24 h，倒去四唑溶液，并吸去残液后，再加滴入乳酸苯酚液，在 35℃条件下 30 min。凡是胚全部染成红色，或仅胚根尖端三分之二不染色的，为有生活力种子。 (4)大豆种子四唑测定 取大豆种子样品 200 粒种子，放在湿毛巾间预湿 12 h，一般需 剥去种皮，然后浸入 1％四唑溶液，35℃条件下 2～3h。凡是整个种子染色正常明亮鲜红， 或仅胚根尖端二分之一不染色，或子叶顶端(离胚芽端)二分之一不染色的为有生活力种子。 (5)棉花种子四唑染色测定 取种子样品 200 粒，放纸间预湿，30℃条件下 12h，纵切

一半种子，或剥去种皮，浸入0.5%四唑溶液，染色反应2一3山，凡是整个种子染成明亮红 色，或仅胚根尖端三分之一不染色，或子叶表面有小范围坏死，或子叶顶端三分之一不染色， 为有生活力种子。 (6)洋葱种子四唑染色测定取种子样品200粒种子，放在湿纸间30℃条件下预湿12h 沿扁平面切去种子上面，露出胚体，放人0.2%四唑溶液0.5一L.。凡是种胚和胚乳全部 染成鲜红色，或仅少量不与胚相连的胚乳不染的，为有生活力种子。 (7)甘蓝种子四唑染色测定取样200粒种子，放入纸间30℃条件下，5一6山，剥去种 皮，浸入1%四唑溶液35℃条件下，2~4h。凡是整个胚染成鲜红色，或仅有胚根尖端三分 之一不染色，或子叶顶端有部分坏死的，为有生活力种子。 (⑧)番茄种子四唑染色测定取样200粒种子，放湿纸间30℃条件下预湿12h,然后在 种子中心刺破种皮和胚乳，浸入0.2%四唑溶液，在35℃条件下染色反应0.5一1.5h。凡 是胚和胚乳全部染色的，为有生活力种子。 (9)黄瓜和西瓜种子四唑染色测定取种子样品200粒，浸入水中，30℃条件下，6~8h, 可纵切一半，或剥去种皮（因西瓜种子表面滑溜，可用软布指擦或用5%硫酸钾铝硬化液处 理，然后进行上述样品准备)。浸入1%四唑溶液35℃条件下，2~3h。凡是整个胚染成鲜红 色，或仅胚根尖端二分之一不染色，或仅子叶顶端二分之一不染色的为有生活力种子。 四、作业 (1)计算种子生活力。 (②)分析染色不正常无生活力种子的类型及其引起的原因

一半种子，或剥去种皮，浸入 0.5％四唑溶液，染色反应 2～3 h，凡是整个种子染成明亮红 色，或仅胚根尖端三分之一不染色，或子叶表面有小范围坏死，或子叶顶端三分之一不染色， 为有生活力种子。 (6)洋葱种子四唑染色测定 取种子样品 200 粒种子，放在湿纸间 30℃条件下预湿 12h， 沿扁平面切去种子上面，露出胚体，放人 0.2％四唑溶液 0.5～1.5h。凡是种胚和胚乳全部 染成鲜红色，或仅少量不与胚相连的胚乳不染的，为有生活力种子。 (7)甘蓝种子四唑染色测定 取样 200 粒种子，放入纸间 30℃条件下，5～6 h，剥去种 皮，浸入 1％四唑溶液 35℃条件下，2～4h。凡是整个胚染成鲜红色，或仅有胚根尖端三分 之一不染色，或子叶顶端有部分坏死的，为有生活力种子。 (8)番茄种子四唑染色测定 取样 200 粒种子，放湿纸间 30℃条件下预湿 12 h，然后在 种子中心刺破种皮和胚乳，浸入 0．2％四唑溶液，在 35℃条件下染色反应 0．5～1.5h。凡 是胚和胚乳全部染色的，为有生活力种子。 (9)黄瓜和西瓜种子四唑染色测定 取种子样品 200 粒，浸入水中，30℃条件下，6～8h， 可纵切一半，或剥去种皮(因西瓜种子表面滑溜,可用软布揩擦或用 5％硫酸钾铝硬化液处 理，然后进行上述样品准备)。浸入 1％四唑溶液 35℃条件下，2～3h。凡是整个胚染成鲜红 色，或仅胚根尖端二分之一不染色，或仅子叶顶端二分之一不染色的为有生活力种子。 四、作业 (1)计算种子生活力。 (2)分析染色不正常无生活力种子的类型及其引起的原因