《临床检验仪器学》课程PPT教学课件（第1版）第17章 PCR基因扩增仪

第十七章P织基因扩增仪 (PCR Gene Amplifier）)

第十七章 PCR基因扩增仪 (PCR Gene Amplifier)

内容提要 1.PCR基因扩增仪的工作原理 ① PCR技术的原理及发展 ② PCR基因扩增仪的工作原理 2.PCR扩增仪的分类与结构 ① 定性PCR扩增仪 ② 实时荧光定量PCR扩增仪 3.PCR扩增仪的性能指标、操作规程及常见故障的排除 ① PCR扩增仪的性能指标 ② PCR扩增仪的操作规程 ③ PCR扩增仪常见故障的排除 4.PCR扩增仪的应用 ◆

◈ ⊃ ► ◄ ■ 内容提要 1. PCR基因扩增仪的工作原理 ① PCR技术的原理及发展 ② PCR基因扩增仪的工作原理 2. PCR扩增仪的分类与结构 ① 定性PCR扩增仪 ② 实时荧光定量PCR扩增仪 3. PCR扩增仪的性能指标、操作规程及常见故障的排除 ① PCR扩增仪的性能指标 ② PCR扩增仪的操作规程 ③ PCR扩增仪常见故障的排除 4. PCR扩增仪的应用

内容提要 3.PCR扩增仪的性能指标、操作规程及常见故障的 排除 ① PCR扩增仪的性能指标 ② PCR扩增仪的操作规程 ③ PCR扩增仪常见故障的排除 4.PCR扩增仪的应用

◈ ⊃ ► ◄ ■ 内容提要 3. PCR扩增仪的性能指标、操作规程及常见故障的 排除 ① PCR扩增仪的性能指标 ② PCR扩增仪的操作规程 ③ PCR扩增仪常见故障的排除 4. PCR扩增仪的应用

教学基本要求 1.掌握PCR基因扩增仪的工作原理和主要性能指标。 2.掌握梯度PCR仪和原位PCR仪的功能和特点。 3.掌握实时荧光定量PCR扩增仪的种类；金属板式实 时定量PCR仪和离心式实时定量PCR仪的特点。 4.熟悉PCR技术的原理；PCR扩增仪的种类；荧光实 时定量PCR(RQ-PCR)技术原理。 5.了解PCR扩增仪的操作规程；PCR扩增仪常见故障 的排除；PCR扩增仪的应用

◈ ⊃ ► ◄ ■ 教学基本要求 1.掌握PCR基因扩增仪的工作原理和主要性能指标。 2.掌握梯度PCR仪和原位PCR仪的功能和特点。 3.掌握实时荧光定量PCR扩增仪的种类；金属板式实 时定量PCR仪和离心式实时定量PCR仪的特点。 4. 熟悉PCR技术的原理；PCR扩增仪的种类；荧光实 时定量PCR（RQ-PCR）技术原理。 5.了解PCR扩增仪的操作规程；PCR扩增仪常见故障 的排除；PCR扩增仪的应用

第一节PCR基因扩增仪的工作原理 一、PCR技术的发展及原理 矿1971年，Kleppe等人首次在文章中准确、 客观地阐述了PCR方法。 g1985年，美国PE-Cetus公司的Kary Mullis等人发明PCR技术

◈ ⊃ ► ◄ ■ 第一节 PCR基因扩增仪的工作原理 一、PCR技术的发展及原理 1971年，Kleppe等人首次在文章中准确、 客观地阐述了PCR方法。 1985年，美国PE-Cetus公司的Kary Mullis等人发明PCR技术

第一节PCR基因扩增仪的工作原理 PCR技术的本质是体外核酸扩增，加热使 双链DNA解开螺旋，在退火温度条件下引 物同模板DNA杂交，在Tag DNA聚合酶， dNTPs,Mg2+和合适pH缓冲液存在条件 下延伸引物，重复“变性→退火→引物延 伸”过程至25-40个循环，呈指数级扩大待 测样本中的核酸拷贝数

◈ ⊃ ► ◄ ■ 第一节 PCR基因扩增仪的工作原理 PCR技术的本质是体外核酸扩增，加热使 双链DNA解开螺旋，在退火温度条件下引 物同模板DNA杂交，在Taq DNA聚合酶， dNTPs，Mg2+和合适pH缓冲液存在条件 下延伸引物，重复 “变性→退火→引物延 伸”过程至25-40个循环，呈指数级扩大待 测样本中的核酸拷贝数

第一节PCR基因扩增仪的工作原理 待扩增DNA区域 5 5 变性 94℃5min 5 5 退火 55℃ PCR的基本原理 =5 5 5 5- 聚合↓ 70℃ 5 5 I 循环25-30次 目标DNA片段达106.107

◈ ⊃ ► ◄ ■ 第一节 PCR基因扩增仪的工作原理 PCR的基本原理

第一节PCR基因扩增仪的工作原理 二、PCR基因扩增仪的工作原理 从PCR反应基本原理可以看出，PCR 基因扩增仪工作关键是温度控制

◈ ⊃ ► ◄ ■ 第一节 PCR基因扩增仪的工作原理 二、PCR基因扩增仪的工作原理 从PCR反应基本原理可以看出，PCR 基因扩增仪工作关键是温度控制

第一节PCR基因扩增仪的工作原理 PCR仪温度控制 水浴锅控温 压缩机控温 半导体控温 离心式空气加热 控温 ■

◈ ⊃ ► ◄ ■ 第一节 PCR基因扩增仪的工作原理 PCR仪温度控制 水浴锅控温 压缩机控温 半导体控温 离心式空气加热 控温

第二节PCR扩增仪的分类与结构 PCR扩增仪的种 类 实时荧光定量 普通PCR扩增必 PCR扩增仪 梯度PCR仪 原位PCR仪

◈ ⊃ ► ◄ ■ 第二节 PCR扩增仪的分类与结构 PCR扩增仪的种 类 普通PCR扩增仪 实时荧光定量 PCR扩增仪 梯度PCR仪 原位PCR仪