山东第一医科大学（泰山医学院）：《细胞生物学》课程课件讲稿（打印版）第三章 细胞生物学研究方法

第三章细胞生物学研究方法 进行初步观察 形成可验证的假说 设计对照试验 查阅已 有知识 收集资料 解释结果 生物学研究模式生物 作出合理结论 不同物种享有共同分子机制

第三章细胞生物学研究方法 细胞形态结构的观察方法 细胞组分的分析方法 细胞培养、细胞工程与显微操作技术

如何学习细胞生物学？ ·抽象思维与动态观点 ·结构与功能统一的观点 ·同一性(unity)和多样性(diversity)的问题 ·细胞生物学的主要内容： 结构与功能（动态特征）； 细胞的生命活动； ·实验科学与实验技术一细胞真知源于实验室 -What we know//How we know. ▣

第一节细胞形态结构的观察方法 ●光学显微镜技术(light microscopy) ●电子显微镜技术(Electro microscopy) ●扫描探针显微镜(Scanning Probe Microscope) 扫描遂道显微镜(scanning tunneling microscope ☑

第二节细胞组分的分析方法 ●离心分离技术 ●细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法 ●特异蛋自抗原的定位与定性 ●细胞内特异核酸的定位与定性 ●放射自显影技术 ●定量细胞化学分析技术 ▣

第三节细胞培养、细胞工程与显微操作技术 ●细胞的培养 ●细胞工程 ☑

一、光学显微镜技术(light microscopy) ●普通复式光学显微镜技术 ●荧光显微镜技术(Fluorescence Microscopy) ●邀光共焦扫描显微镜技术(Laser Confocal Microscopy) ●相差显微镜（phase-contrast microscope) ●微分王涉显微镜 (differential interference contrast microscope,DIC) ●录像增差显微镜技术(video-enhance microscopy) ☒

二、电子显微镜技术 ●电子显微镜的基本知识 ◆电镜与光镜的比较 ◆电镜与光镜光路图比较 ◆电子显微镜的基本构造 。主要电镜制样技术 ◆负染色技术 ◆冰冻蚀刻技术 ◆超薄切片技术 ◆电镜三维重构技术 ●扫描电镜(Scanning electron microscope,SEM) SPM(Scanning probe microscope) ☑

三、扫描遂道显微镜 Scanning Probe Microscope,SPM (80年代发展起来的检测样品微观结构的仪器) 包括：STM、AFM、磁力显微镜、摩擦力显微镜等 原理：扫描探针与样品接触或达到很近距离时，即产生彼此间相互作用力，如 量子力学中的隧道效应（隧道电流）、原子间作用力、磁力、摩擦力等， 并在计算机显示出来，从而反映出样品表面形貌信息、电特性或磁特性等。 ◆装置：扫描的压电陶瓷，逼近装置，电子学反馈控制系统和数据采集、处理、显示 系统。 ◆特点：(1)可对晶体或非晶体成像，无需复杂计算，且分辨本领高。 (侧分辨率为0.1~0.2nm,纵分辨率可达0.01nm); (2)可实时得到样品表面三维图象，可测量厚度信息： (3)可在真空、大气、液体等多种条件下工作；非破坏性测量。 (4)可连续成像，进行动态观察 ◆用途：纳米生物学研究领域中的重要工具，在原子水平上揭示样本表面的结构

普通复式光学显微镜技术 光镜样本制作 分辨率是指区分开两个质点间的最小距离 0.61入 D=N.Sina./2 ☑