遵义医科大学：《医学免疫学》课程教学资源（PPT实验专题课件）细胞凋亡检测（任课老师：李俊、陈超）

研究生免疫学技术实验内容简介 细胞调亡检测 任课老师： 李俊 陈超 一二三四五六七八 遵义医学院免疫学教研室制作：姚新生Emai TeL1398567159]

遵义医学院免疫学教研室 制作: 姚新生 E-mail: immunology@126.com immunology01@msn.com Tel: 13985671591 一 二 三 四 五 六 七 八 研究生免疫学技术实验内容简介 细胞凋亡检测 任课老师： 李俊 陈超

研究生免疫学技术实验内容简介 细胞死亡 人体内的细胞注定是要死亡的，有些死亡是生理性 的，有些死亡则是病理性的。 细胞死亡方式：细胞程序性死亡（PCD)与细胞凋 亡(apoptosis) PCD=Apoptosis？?? 一二三四五六七八 遵义医学院免疫学教研室制作：姚新生E-mail Tel:1398567159

遵义医学院免疫学教研室 制作: 姚新生 E-mail: immunology@126.com immunology01@msn.com Tel: 13985671591 一 二 三 四 五 六 七 八 研究生免疫学技术实验内容简介 人体内的细胞注定是要死亡的，有些死亡是生理性 的，有些死亡则是病理性的。 细胞死亡方式：细胞程序性死亡（PCD）与细胞凋 亡（apoptosis） PCD=Apoptosis ？？？ 细胞死亡

研究生免疫学技术实验内容简介 细胞凋亡 概念 凋亡过程 凋亡是细胞对环境的生理性病 o凋亡起始 押性制邀信是 环培冬仕的变 ⑩凋亡小体形成 接受凋亡 调亡调控分子 蛋白水解酶 连续反映过 信号 性： 的相互作用 答有 的活化 程 序变化的死亡过程。 的细胞或体内吞噬细胞 所吞噬，凋亡细胞的残 余物质被消化后重新利 用 一二三四五六七八 遵义医学院免疫学教研室制作：姚新生Emai TeL1398567159]

遵义医学院免疫学教研室 制作: 姚新生 E-mail: immunology@126.com immunology01@msn.com Tel: 13985671591 一 二 三 四 五 六 七 八 研究生免疫学技术实验内容简介 概念 凋亡是细胞对环境的生理性病 理性刺激信号，环境条件的变 化或缓和性损伤产生的应答有 序变化的死亡过程。 细胞凋亡 凋亡起始 凋亡小体形成 凋亡小体逐渐被邻近 的细胞或体内吞噬细胞 所吞噬，凋亡细胞的残 余物质被消化后重新利 用 凋亡过程 接受凋亡 信号 凋亡调控分子 的相互作用 蛋白水解酶 的活化 连续反映过 程

研究生免疫学技术实验内容简介 图15.1 细胞凋亡过程中形态发生改变的示意图电子云密度大，黑 在收到细胞调亡信号后，一个黏附细胞()开始变成圆的(b),细胞核固缩(c)、 DNA断裂，细胞核崩裂成染色质片段(d);最后，细胞裂解为几个囊泡（凋亡小体）（©） 然后被周围细胞吞噬() 一二三四五六七八 遵义医学院免疫学教研室制作：姚新生Bmal Te1398567159

遵义医学院免疫学教研室 制作: 姚新生 E-mail: immunology@126.com immunology01@msn.com Tel: 13985671591 一 二 三 四 五 六 七 八 研究生免疫学技术实验内容简介

研究生免疫学技术实验内容简介 凋亡的信号通路 Signal,Combination with BiP Unfolded Release Activate Proteins BIP PERK Form Complexes Inhibit Phosphorylation Activate Promote Apoptosis Protein synthesis Promote Pro-apoptotic protein synthesis Apoptosis elF-2a .w GADD34 Inhibit elF-2a Phosphorylation Promote Apoptosis Actirate BCL-2 ATF4 CHOP/GADD153 Promote Transcription 一二三四 五六七八 遵义医学院免疫学教研室制作：姚新生Emai TeL1398567159]

遵义医学院免疫学教研室 制作: 姚新生 E-mail: immunology@126.com immunology01@msn.com Tel: 13985671591 一 二 三 四 五 六 七 八 研究生免疫学技术实验内容简介 凋亡的信号通路

研究生免疫学技术实验内容简介 细胞凋心的检则 方法 早期检 Annesin V-FITC Aanexin V-PITC Binding APOPTOSIS PS(磷 Cytoplasmic Membrane PS从细 Normal Cell Apoptotic Cell 发生， Phosphatidyl Serine 钙依赖性的磷脂结合蛋白，能专一性的结合暴露在膜外 侧的P$,再通过简单的显色或发光系统进行检测 一 二三四五六七八 遵义医学院免疫学教研室制作：姚新生E-mail

遵义医学院免疫学教研室 制作: 姚新生 E-mail: immunology@126.com immunology01@msn.com Tel: 13985671591 一 二 三 四 五 六 七 八 研究生免疫学技术实验内容简介 细胞凋亡的检测 方法 早期检测： PS（磷脂酰丝氨酸）在细胞外膜上的检测： PS从细胞膜内侧转移到外侧在细胞受到凋亡诱导后不久 发生，可能作为免疫系统的识别标志。AnnexinV，一个 钙依赖性的磷脂结合蛋白，能专一性的结合暴露在膜外 侧的PS，再通过简单的显色或发光系统进行检测

研究生免疫学技术实验内容简介 细胞凋亡的检测 方法 晚期检测 TUNEL法 碘化丙啶(Propidine 通过DNA末端转移酶将带标记的 lodide,Pl): dNTP（多为dUTP)间接（通过地 一种核酸染料，它不能 高辛)或直接接到DNA片段的3'- 透过完整的细胞膜，但 OH端，再通过酶联显色或荧光检测 可进入凋亡中晚期的细 定量分析结果。 胞和死细胞，而使细胞 核红染。 二三四五六七八 遵义医学院免疫学教研室制作：姚新生E-mail TeL1398567159]

遵义医学院免疫学教研室 制作: 姚新生 E-mail: immunology@126.com immunology01@msn.com Tel: 13985671591 一 二 三 四 五 六 七 八 研究生免疫学技术实验内容简介 晚期检测 TUNEL法 通过DNA末端转移酶将带标记的 dNTP （多为dUTP）间接（通过地 高辛）或直接接到DNA片段的3’- OH端，再通过酶联显色或荧光检测 定量分析结果。 细胞凋亡的检测 方法 碘化丙啶(Propidine lodide,PI)： 一种核酸染料，它不能 透过完整的细胞膜，但 可进入凋亡中晚期的细 胞和死细胞，而使细胞 核红染

研究生免疫学技术实验内容简介 细胞凋亡的检侧 方法 Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡 可以将凋亡早期的细胞和凋亡晚期以及死细胞区分开。 一二三四五六七八 遵义医学院免疫学教研室制作：姚新生E-mail m Tel:13985671591

遵义医学院免疫学教研室 制作: 姚新生 E-mail: immunology@126.com immunology01@msn.com Tel: 13985671591 一 二 三 四 五 六 七 八 研究生免疫学技术实验内容简介 Annexin V/PI 双染法检测细胞凋亡 可以将凋亡早期的细胞和凋亡晚期以及死细胞区分开。 细胞凋亡的检测 方法

研究生免疫学技术实验内容简介 细胞凋亡的检测 方法 形态学检测： 1.光学显微镜和倒置显微镜 2.荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜 细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。 常用的DNA特异性染料有：H033342(Hoechst33342),H033258 (Hoechst33258),DAPI。与DNA的碱基区结合后，紫外光激发时发射 明亮的蓝色荧光。 一二三四五六七八 遵义医学院免疫学教研室制作：姚新生E-mail Tel1398567159]

遵义医学院免疫学教研室 制作: 姚新生 E-mail: immunology@126.com immunology01@msn.com Tel: 13985671591 一 二 三 四 五 六 七 八 研究生免疫学技术实验内容简介 形态学检测： 1．光学显微镜和倒置显微镜 2．荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜 细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。 常用的DNA特异性染料有：HO 33342 (Hoechst 33342），HO 33258 (Hoechst 33258),DAPI。与DNA的碱基区结合后，紫外光激发时发射 明亮的蓝色荧光。 细胞凋亡的检测 方法

研究生免疫学技术实验内容简介 形态学检测 (DAPI) ·细胞：HCT116细胞系 凋亡诱导：H202 ·染色：DAPI 。 染色部位：细胞核 。特殊仪器： 荧光显微镜 。操作环境：细胞室 一二三 四五六七八 遵义医学院免疫学教研室制作：姚新生al

遵义医学院免疫学教研室 制作: 姚新生 E-mail: immunology@126.com immunology01@msn.com Tel: 13985671591 一 二 三 四 五 六 七 八 研究生免疫学技术实验内容简介 形态学检测（DAPI） • 细胞：HCT116细胞系 • 凋亡诱导：H2O2 • 染色：DAPI • 染色部位：细胞核 • 特殊仪器：荧光显微镜 • 操作环境：细胞室