华南师范大学:《医学分子生物学》课程教学课件(PPT讲稿)第九章 DNA序列测定 第十章 核酸分子杂交技术

真核表达体系 转染方法 磷酸钙沉淀 DEAE葡聚糖介导转染 电穿孔 脂质体转染;人造膜 显微注射 筛选标志 tk- Neor g418 瞬时转染目的基因不整合进宿主基因组 稳定转染目的基因整合进宿主基因组
真核表达体系 • 转染方法 – 磷酸钙沉淀 – DEAE葡聚糖介导转染 – 电穿孔 – 脂质体转染;人造膜 – 显微注射 • 筛选标志 tk- Neo r G418 • 瞬时转染 目的基因不整合进宿主基因组 • 稳定转染 目的基因整合进宿主基因组

tk细胞突变祩筛选转染细胞 胸苷激酶(tk) TTP:从头合成(氨甲喋呤阻断),补救合 成 HAT选择(H:次黄嘌呤;A:氨甲喋呤; T:胸苷) tk+:生长 tk+带tk基因的质粒:生长
tk- 细胞突变株筛选转染细胞 • 胸苷激酶(tk) – TTP:从头合成(氨甲喋呤阻断),补救合 成 – HAT选择(H:次黄嘌呤;A:氨甲喋呤; T:胸苷) – tk+:生长 – tk-+带tk基因的质粒:生长

药物筛选转染细胞 neo 新霉素:细菌抗生素,干扰原核生物蛋白质 合成 G418:千扰原核、真核生物 neo:磷酸转移酶,使G418失活 neo与目的基因连锁,转染
药物筛选转染细胞 • neor – 新霉素:细菌抗生素,干扰原核生物蛋白质 合成 – G418:干扰原核、真核生物 – neo:磷酸转移酶,使G418失活 – neo 与目的基因连锁,转染

收集细胞(离心) 裂解细胞(溶菌酶、匀浆或超声液) 回收包涵体(离心:1001200) 洗涤包涵体(含去污剂的缓冲液) 裂解包涵体及溶解蛋白质(变性剂溶液:尿素或盐酸胍,可含去污剂或巯基试剂) 变性蛋白质的纯化色谱法) 蛋白质复性(缓慢稀释变性剂:透析法或稀释法) 获得得有活性的蛋白质 图617从包涵体中提取活性蛋白质的流程

目的基因的定点诱变及其应用 基因定点诱变技术 基因定点诱变技术的应用 长效胰岛素、快速吸收胰岛素 基因克隆的改建 *碱性成纤维细胞生长因子(bFGH):牛源性→ 人源性,2个核苷酸的差异
目的基因的定点诱变及其应用 • 基因定点诱变技术 • 基因定点诱变技术的应用 – 长效胰岛素、快速吸收胰岛素 – 基因克隆的改建 * 碱性成纤维细胞生长因子(bFGH):牛源性→ 人源性,2个核苷酸的差异

A TTCT GGATACCCA-5′ 诱变引物 AAGAG CCTATGGGT M13 (Wild Type) TAG ATC am dNTP DN Apol 传代 杂交 复制 TCG AGC W. T 图5-4定点窦变技术建立琥珀型突变体

n M13 M13 M13 甲 丙 图5-5引物设计原则 甲:多点寞变;乙:缺失突变;丙:插入突变

容许宿主 模板 U>T (dut ung 含U模板 RZ1032 甲 乙 A 模板-引物杂交 dNTP 延长 U DNApol 丙 非容许宿主 JM103 容许宿主 RZ1032 1/2 A A 存 死 活 戊 图5-8定点突变的 Kunkel法

原有序列 改建成 TTTGAA~定点突变 TTCGAA一 (不是限制性内切酶切点) ( Hind il切点)

第九章DNA序列测定 末端终止法-待测单链DNA模板引物 四种dNTP(其中一种用2P/5标记)终止剂 ( ddNtP)DNA聚合酶 Sanger发明:两次获得诺贝尔奖 分别得到 dda ddt ddg ddo结尾的片段
第九章 DNA序列测定 • 末端终止法--待测单链DNA 模板 引物 四种dNTP(其中一种用32P/35S标记) 终止剂 (ddNTP) DNA聚合酶 • Sanger发明:两次获得诺贝尔奖 • 分别得到ddA ddT ddG ddC结尾的片段
按次数下载不扣除下载券;
注册用户24小时内重复下载只扣除一次;
顺序:VIP每日次数-->可用次数-->下载券;
- 华南师范大学:《医学分子生物学》课程教学课件(PPT讲稿)第七章 真核生物基因表达调控.ppt
- 华南师范大学:《医学分子生物学》课程教学课件(PPT讲稿)第十六章 基因诊断 Gene Diagnosis.ppt
- 华南师范大学:《医学分子生物学》课程教学课件(PPT讲稿)第五章 基因表达(转录)Gene Expression.ppt
- 华南师范大学:《医学分子生物学》课程教学课件(PPT讲稿)翻译 Translation(主讲:董彩虹).ppt
- 华南师范大学:《医学分子生物学》课程教学课件(PPT讲稿)蛋白质结构与功能、生物大分子的相互作用.ppt
- 华南师范大学:《医学分子生物学》课程教学课件(PPT讲稿)第十五章 癌基因与抑癌基因.ppt
- 华南师范大学:《医学分子生物学》课程教学课件(PPT讲稿)转基因生物和基因打靶.ppt
- 华南师范大学:《医学分子生物学》课程教学课件(PPT讲稿)第十七章 基因治疗.ppt
- 华南师范大学:《医学分子生物学》课程教学课件(PPT讲稿)第八章 基因工程.ppt
- 华南师范大学:《医学分子生物学》课程教学课件(PPT讲稿)第二章 核酸和蛋白质的结构与功能 Structures &functions of nucleic acid &protein.ppt
- 华南师范大学:《医学分子生物学》课程教学课件(PPT讲稿)第四章 复制 replication.ppt
- 华南师范大学:《医学分子生物学》课程教学课件(PPT讲稿)第十三章 DNA芯片技术.ppt
- 华南师范大学:《分子生物学》课程PPT教学课件(双语版)核酸的体外扩增(主讲:盛德乔).ppt
- 华南师范大学:《分子生物学》课程PPT教学课件(双语版)真核生物基因表达的调控.ppt
- 华南师范大学:《分子生物学》课程PPT教学课件(双语版)基因表达的调控.ppt
- 华南师范大学:《分子生物学》课程PPT教学课件(双语版)转位因子(transposableelement).ppt
- 华南师范大学:《分子生物学》课程PPT教学课件(双语版)Structures &functions of genome.ppt
- 华南师范大学:《分子生物学》课程PPT教学课件(双语版)原核生物基因表达调控.ppt
- 华东理工大学:《发酵工程 Fermentation Engineering》课程教学资源(PPT课件讲稿)第十二章 工业污水处理.ppt
- 华东理工大学:《发酵工程 Fermentation Engineering》课程教学资源(PPT课件讲稿)第三章 发酵工艺条件的优化.ppt
- 华南师范大学:《医学分子生物学》课程教学课件(PPT讲稿)第七章 细胞通讯(cell communication)与信号转导(signal transduction).ppt
- 华南师范大学:《医学分子生物学》课程教学课件(PPT讲稿)第七章 信号转导(signal transduction).ppt
- 清华大学:《生物化学》课程PPT教学课件(英文版)Biological Membranes and Transport(1/2).ppt
- 清华大学:《生物化学》课程PPT教学课件(英文版)Biological Membranes and Transport(2/2).ppt
- 清华大学:《生物化学》课程PPT教学课件(英文版)Lipids-Introduction(主讲:裴端卿).ppt
- 安微师范大学教育科学学院:《普通心理学》课程教学资源(PPT课件讲义,共十一章).ppt
- 《微生物生态学——Microbial Ecology》第三讲 微生物之间及其与动、植物的相互作用.ppt
- 西华大学生物工程学院:《微生物学》第10章 微生物与基因工程(车振明).ppt
- 西华大学生物工程学院:《微生物学》第12章 微生物生态(车振明).ppt
- 酒泉职业技术学院:《植物生理学》(PPT课件)第四章 植物的呼吸作用.ppt
- 酒泉职业技术学院:《植物生理学》(PPT课件)第一章 植物的水分代谢.ppt
- 酒泉职业技术学院:《植物生理学》(PPT课件)第二章 植物的矿质营养.ppt
- 酒泉职业技术学院:《植物生理学》(PPT课件)第三章 植物的光合作用.ppt
- 酒泉职业技术学院:《植物生理学》(PPT课件)第九章 光形态建成.ppt
- 酒泉职业技术学院:《植物生理学》(PPT课件)第五、六章 植物体内有机物的代谢与运输.ppt
- 酒泉职业技术学院:《植物生理学》(PPT课件)第八章 植物生长物质.ppt
- 酒泉职业技术学院:《植物生理学》(PPT课件)第十一章 植物的生殖生理.ppt
- 酒泉职业技术学院:《植物生理学》(PPT课件)第十二章 植物休眠、衰老与脱落.ppt
- 酒泉职业技术学院:《植物生理学》(PPT课件)第七章 植物体内的细胞信号转导.ppt
- 酒泉职业技术学院:《植物生理学》(PPT课件)第十章 植物的生长生理.ppt