广东轻工职业技术学院:《微生物学》课程教学课件(PPT讲稿)第八章 菌种保藏

第五章 菌种保藏 ·、菌种的衰退与复壮的 1.衰退: 菌种在培养或保藏过程中,由于自发突变的 存在,出现某些原有优良生产性状的劣化、 遗传标记的丢失等现象,称为菌种的衰退。 衰退的原因:①基因突变, ②分离现象
第五章 菌种保藏 一、菌种的衰退与复壮的 1.衰退: 菌种在培养或保藏过程中,由于自发突变的 存在,出现某些原有优良生产性状的劣化、 遗传标记的丢失等现象,称为菌种的衰退。 衰退的原因:①基因突变, ②分离现象

常见的衰退现象: 菌落和细胞形态的改变; 生长速度缓慢,产孢子越来越少; 抵抗力、抗不良环境能力减弱等。 代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降;
常见的衰退现象: 菌落和细胞形态的改变; 生长速度缓慢,产孢子越来越少; 抵抗力、抗不良环境能力减弱等。 代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降;

2、菌种的复壮: 使衰退的菌种恢复原来优良性状。狭义的复 壮是指在菌种已发生衰退的情况下,通过纯种 分离和生产性能测定等方法,从衰退的群体中 找出未衰退的个体,以达到恢复该菌原有典型 性状的措施;广义的复壮是指在菌种的生产性 能未衰退前就有意识的经常、进行纯种的分离 和生产性能测定工作,以期菌种的生产性能逐 步提高。实际上是利用自发突变(正变)不断 地从生产中选种
2、 菌种的复壮: 使衰退的菌种恢复原来优良性状。狭义的复 壮是指在菌种已发生衰退的情况下,通过纯种 分离和生产性能测定等方法,从衰退的群体中 找出未衰退的个体,以达到恢复该菌原有典型 性状的措施;广义的复壮是指在菌种的生产性 能未衰退前就有意识的经常、进行纯种的分离 和生产性能测定工作,以期菌种的生产性能逐 步提高。实际上是利用自发突变(正变)不断 地从生产中选种

菌种的复壮措施: 纯种分离:(平板划线法、 涂布法、倾注法、单 细胞挑取法等); 通过寄主体内生长进行复壮(如Baci/1ws thur ingiensis的复壮); 淘汰已衰退的个体(采用比较激烈的理化条件进 行处理,以杀死生命力较差的已衰退个体); 采用有效的菌种保藏方法
菌种的复壮措施: 纯种分离:(平板划线法、涂布法、倾注法、单 细胞挑取法等); 通过寄主体内生长进行复壮(如Bacillus thuringiensis的复壮) ; 淘汰已衰退的个体(采用比较激烈的理化条件进 行处理,以杀死生命力较差的已衰退个体); 采用有效的菌种保藏方法

3、防止菌种衰退的方法: 控制传代次数(一般在DNA的复制过程中,碱基 的错配率是5x104,自发突变的频率为108~109, 采用良好的菌种保藏方法,可以减少移种和传代 的数); 选择合适的培养条件; 采用不同类型的细胞进行传代(对丝状微生物 而言,通常采用稳定的单核孢子进行接种); 采用有效的菌种保藏方法
3、防止菌种衰退的方法: 控制传代次数(一般在DNA的复制过程中,碱基 的错配率是5x10-4,自发突变的频率为10-8~10-9 , 采用良好的菌种保藏方法,可以减少移种和传代 的数); 选择合适的培养条件; 采用不同类型的细胞进行传代(对丝状微生物 而言,通常采用稳定的单核孢子进行接种); 采用有效的菌种保藏方法

二、菌种保藏 目的: 存活,不丢失,不污染; 防止优良性状丧失; 随时为生产、科研提供优良菌种。 2.原理:选用优良的纯种,(最好是休眠体,如 分生孢子、芽胞等),创造降低微生物代谢活 动强度,生长繁殖受抑制,难以发生突变的环 境条件。(其环境要素是干燥、低温、缺氧、 缺营养以及添加保护剂等)
二、菌种保藏 1、目的: 存活,不丢失,不污染; 防止优良性状丧失; 随时为生产、科研提供优良菌种。 2. 原理:选用优良的纯种,(最好是休眠体,如 分生孢子、芽胞等),创造降低微生物代谢活 动强度,生长繁殖受抑制,难以发生突变的环 境条件。(其环境要素是干燥、低温、缺氧、 缺营养 以及添加保护剂等)

3.菌种保藏的方法 菌 连续在培养基上(内)移种 生活态 连续在活宿主上(内)移种 种保藏方 传代培养保藏法 固体斜面 湿法半固体琼脂柱 休眠态 液体介质(蒸馏水、糖液、其它溶液) 干法 藏在玻璃管内 吸附在合适的载体上
3.菌种保藏的方法 菌 连续在培养基上(内)移种 种 生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上(内)移种 保 固体斜面 藏 湿法 半固体琼脂柱 方 休眠态 液体介质(蒸馏水、糖液、其它溶液) 法 干法 藏在玻璃管内 吸附在合适的载体上

方法: ①低温保藏法: 方法:菌种管置4℃冰箱保藏,定时传代 。 原理:低温下,微生物代谢强度明显下降。 ②石蜡油低温保藏法: 橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。 ③干燥保藏法 将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材 料上保藏。如砂土管法,适用于放线菌、芽孢菌 和某些真菌保藏,保藏时间几至几十年
方法: ①低温保藏法: 方法:菌种管置4℃冰箱保藏,定时传代 。 原理:低温下,微生物代谢强度明显下降 。 ②石蜡油低温保藏法: 橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。 ③干燥保藏法 将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材 料上保藏。如砂土管法,适用于放线菌、芽孢菌 和某些真菌保藏,保藏时间几至几十年

④真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。 适用于各种微生物,便于大量保藏,菌种存活时间 长,是目前最好的保藏方法。 ⑤液氮超低温保藏法 将菌种置于保护剂中,预冻后保存在液氮超低温冰 箱中(-196℃)。 适用于各种微生物的较理想的保藏方法
④真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。 适用于各种微生物,便于大量保藏,菌种存活时间 长,是目前最好的保藏方法。 ⑤液氮超低温保藏法 将菌种置于保护剂中,预冻后保存在液氮超低温冰 箱中( -196℃)。 适用于各种微生物的较理想的保藏方法

干法保藏菌种的方法 滴入小试管(在放入大试管干燥器中) 藏在玻璃管内封入安培瓶了菌液直接真空干燥法(L-干燥法) L 冷冻真空干燥法 细粒状载体(土壤、沙粒、土壤+沙粒) 球块状载体(硅胶、瓷球) 合适的载体 有机基质(曲料、麦粒) 滤纸片 薄片状载体了明胶小片(滴在蜡纸板上干燥而成) 血清蛋白小片(.乙烯薄膜.)
干法保藏菌种的方法 滴入小试管(在放入大试管干燥器中) 藏在玻璃管内 封入安培瓶 菌液直接真空干燥法(L-干燥法) 冷冻真空干燥法 细粒状载体(土壤、沙粒、土壤+沙粒) 球块状载体(硅胶、瓷球) 合适的载体 有机基质(曲料、麦粒) 滤纸片 薄片状载体 明胶小片(滴在蜡纸板上干燥而成) 血清蛋白小片(.乙烯薄膜. )
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